| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 缩略语表（ABBREVIATION） | 第13-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-45页 |
| 1.1 TRIM家族蛋白简介 | 第15-32页 |
| 1.1.1 TRIM蛋白的结构与功能 | 第18-20页 |
| 1.1.2 TRIM蛋白对宿主抗病毒天然免疫的调控 | 第20-32页 |
| 1.2 NF-κB信号通路简介 | 第32-38页 |
| 1.2.1 TRIM蛋白对NF-κB信号通路的调控 | 第35-38页 |
| 1.3 乙型脑炎病毒简介 | 第38-45页 |
| 1.3.1 乙型脑炎病毒分子生物学特性 | 第39-43页 |
| 1.3.2 乙型脑炎病毒与宿主的作用关系 | 第43-45页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第45-46页 |
| 第3章 材料与方法 | 第46-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-49页 |
| 3.1.1 工程菌、细胞和病毒 | 第46页 |
| 3.1.2 克隆载体和表达质粒 | 第46页 |
| 3.1.3 主要药品和试剂 | 第46-47页 |
| 3.1.4 主要培养液和缓冲液的配置 | 第47-49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-62页 |
| 3.2.1 表达质粒的建立 | 第49-51页 |
| 3.2.2 限制性内切酶酶切反应 | 第51页 |
| 3.2.3 DNA凝胶电泳与DNA的纯化回收 | 第51页 |
| 3.2.4 酶切产物回收与纯化 | 第51页 |
| 3.2.5 外源DNA片段与质粒载体的连接 | 第51页 |
| 3.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| 3.2.7 连接产物的转化 | 第52页 |
| 3.2.8 质粒DNA的小量制备 | 第52-53页 |
| 3.2.9 细胞的传代 | 第53页 |
| 3.2.10 瞬时转染 | 第53-54页 |
| 3.2.11 病毒增殖 | 第54页 |
| 3.2.12 病毒噬斑实验 | 第54页 |
| 3.2.13 表达TRIM的慢病毒的小量生产 | 第54-55页 |
| 3.2.14 慢病毒的转导 | 第55页 |
| 3.2.15 JEV的感染实验 | 第55-56页 |
| 3.2.16 免疫共沉淀实验 | 第56页 |
| 3.2.17 免疫印迹实验 | 第56-57页 |
| 3.2.18 GST pull-down实验 | 第57页 |
| 3.2.19 免疫荧光与激光共聚焦显微镜观察 | 第57页 |
| 3.2.20 实时荧光定量PCR检测 | 第57-59页 |
| 3.2.21 体内泛素化检测 | 第59页 |
| 3.2.22 双荧光素酶报告基因实验 | 第59-60页 |
| 3.2.23 细胞核蛋白的分离 | 第60页 |
| 3.2.24 细胞因子和药物处理 | 第60页 |
| 3.2.25 筛选抑制TNFa诱导p65入核的TRIM蛋白 | 第60-61页 |
| 3.2.26 统计学方法 | 第61-62页 |
| 第4章 结果与分析 | 第62-97页 |
| 4.1 TRIM52抑制乙型脑炎病毒复制的分子机制研究 | 第62-77页 |
| 4.1.1 表达TRIM蛋白的慢病毒表达质粒的构建 | 第62页 |
| 4.1.2 JEV实时荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第62-63页 |
| 4.1.3 影响JEV复制的TRIM基因筛选 | 第63-64页 |
| 4.1.4 TRIM52的表达抑制JEV复制 | 第64-65页 |
| 4.1.5 TRIM52与JEV非结构蛋白NS2A相互作用 | 第65-67页 |
| 4.1.6 TRIM52与NS2A直接相互作用 | 第67-68页 |
| 4.1.7 RING结构域影响TRIM52与NS2A的相互作用 | 第68-69页 |
| 4.1.8 TRIM52具有RING类型E3泛素连接酶功能 | 第69-71页 |
| 4.1.9 TRIM52通过蛋白酶体途径影响NS2A的蛋白稳定性 | 第71-74页 |
| 4.1.10 TRIM52介导NS2A发生K48类型泛素化修饰 | 第74-76页 |
| 4.1.11 RING结构域在TRIM52抑制JEV复制中起关键作用 | 第76-77页 |
| 4.2 TRIM52正调控NF-κB信号通路分子机制的探讨 | 第77-85页 |
| 4.2.1 影响NF-κB启动子活性的TRIM蛋白筛选 | 第77-78页 |
| 4.2.2 TRIM52特异性激活NF-κB启动子活性 | 第78-79页 |
| 4.2.3 过表达TRIM52上调NF-κB介导的前炎性细胞因子的表达 | 第79页 |
| 4.2.4 TRIM52的RING结构域是其激活NF-κB所必需的 | 第79-80页 |
| 4.2.5 过表达TRIM52不影响IkBa和磷酸化p65的蛋白水平变化 | 第80-81页 |
| 4.2.6 NF-κB激活抑制剂不影响TRIM52对NF-κB的激活 | 第81-82页 |
| 4.2.7 TRIM52蛋白在细胞内亚定位分析 | 第82-83页 |
| 4.2.8 前炎性细胞因子TNFa诱导TRIM52的表达 | 第83-85页 |
| 4.3 TRIM67抑制TNFa介导的NF-κB激活的分子机制 | 第85-97页 |
| 4.3.1 表达TRIM67抑制TNFa诱导的p65核转运 | 第85-87页 |
| 4.3.2 TRIM67抑制TNFa诱导的IkBa降解 | 第87页 |
| 4.3.3 TRIM67抑制TNFa对NF-κB启动子的激活 | 第87-88页 |
| 4.3.4 TRIM67抑制NF-κB介导的前炎性因子的表达 | 第88-89页 |
| 4.3.5 TRIM67的N端结构域参与抑制TNFa诱导的IkBa降解 | 第89-90页 |
| 4.3.6 TRIM67的N端结构域参与抑制TNFa诱导的NF-κB激活 | 第90-91页 |
| 4.3.7 TRIM67在IkBa-p65水平调控TNFa诱导的NF-κB激活 | 第91-92页 |
| 4.3.8 TRIM67与FBXW11（βTrCP）相互作用 | 第92-94页 |
| 4.3.9 TRIM67的N端结构域与 βTrCP的C端结构域相互作用 | 第94-97页 |
| 第5章 讨论和结论 | 第97-106页 |
| 5.1 讨论 | 第97-105页 |
| 5.1.1 TRIM52靶向JEV非结构蛋白NS2A降解而抑制JEV的复制 | 第97-100页 |
| 5.1.2 TRIM52激活NF-κB信号通路的潜在机制 | 第100-102页 |
| 5.1.3 TRIM67靶向 βTr CP抑制TNFa介导的NF-κB信号通路激活 | 第102-105页 |
| 5.2 结论 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-119页 |
| 附录 | 第119-124页 |
| 个人资料 | 第124页 |
| 发表论文 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
