| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 中文文摘 | 第4-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 大豆过氧化物酶 | 第10-13页 |
| 1.1.1 大豆过氧化物酶的结构与性质 | 第11页 |
| 1.1.2 大豆过氧化物酶的生物学功能及应用 | 第11-13页 |
| 1.2 大豆过氧化物酶的生产方法 | 第13-15页 |
| 1.2.1 大豆过氧化物酶的传统生产方法 | 第13页 |
| 1.2.2 微生物发酵法生产大豆过氧化物酶 | 第13-15页 |
| 1.3 大豆过氧化物酶的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.4 强化大豆过氧化物酶活性中Heme基团合成代谢途径 | 第16页 |
| 1.5 主要研究内容和意义 | 第16-18页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第16-17页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第17-18页 |
| 第一章 增强Heme合成代谢途径及糖基化位点突变对SBP酶活的影响 | 第18-48页 |
| 第一节 实验材料 | 第19-22页 |
| 1.1 材料 | 第20页 |
| 1.2 主要仪器 | 第20页 |
| 1.3 培养基和溶液 | 第20-22页 |
| 1.4 生化试剂 | 第22页 |
| 第二节 实验方法 | 第22-31页 |
| 2.1 总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.2 设计PCR扩增SBP基因引物与验证引物 | 第22-23页 |
| 2.3 RT-PCR获得cDNA | 第23页 |
| 2.4 PCR获得目的基因 | 第23页 |
| 2.5 目的DNA片段的回收及保存 | 第23-24页 |
| 2.6 酶切、连接、转化并验证 | 第24-25页 |
| 2.7 提取质粒 | 第25-26页 |
| 2.8 载体线性化与转化毕赤酵母X-33 | 第26页 |
| 2.9 大豆过氧化物酶于野生型毕赤酵母X-33中诱导表达 | 第26页 |
| 2.10 SBP酶活检测方法 | 第26-27页 |
| 2.11 SBP基因上糖基化位点的突变 | 第27-28页 |
| 2.12 构建增强Heme合成途径几个关键酶的表达载体 | 第28-30页 |
| 2.13 过表达STT3基因对SBP酶活的影响 | 第30页 |
| 2.14 构建SBP氨基酸N端带有His标签的SBP菌株 | 第30-31页 |
| 第三节 结果与分析 | 第31-44页 |
| 3.1 SBP大豆过氧化物酶SBP目的基因的获得 | 第31页 |
| 3.2 大豆过氧化物酶于毕赤酵母X-33中的表达 | 第31-32页 |
| 3.3 糖基化位点突变对SBP表达的影响 | 第32-33页 |
| 3.4 过表达单个基因：ALAS、PBGD、Fer、UroD对SBP酶活的影响 | 第33-38页 |
| 3.5 过表达Heme合成途径中两个关键酶组合对SBP酶活影响 | 第38-41页 |
| 3.6 过表达Heme合成途径中三个关键酶组合对SBP酶活影响 | 第41-42页 |
| 3.7 过表达STT3基因对SBP酶活的影响 | 第42-43页 |
| 3.8 SBP氨基酸N端带有His标签的SBP菌株表达结果 | 第43-44页 |
| 第四节 小结与讨论 | 第44-48页 |
| 第二章 大豆过氧化物酶SBP发酵条件优化 | 第48-58页 |
| 第一节 材料与方法 | 第48-51页 |
| 1.1 材料 | 第48-49页 |
| 1.2 方法 | 第49-51页 |
| 第二节 结果与讨论 | 第51-55页 |
| 2.1 不同pH值诱导培养基对SBP诱导表达的影响 | 第51-52页 |
| 2.2 起始诱导生物量对SBP表达的影响 | 第52页 |
| 2.3 诱导物甲醇浓度对SBP表达的影响 | 第52-53页 |
| 2.4 Heme添加量对SBP酶活的影响 | 第53-54页 |
| 2.5 不同表面活性剂处理细胞对SBP酶活影响 | 第54-55页 |
| 2.6 5L发酵罐发酵结果 | 第55页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第55-58页 |
| 第三章 结论 | 第58-62页 |
| 1.大豆过氧化物酶在野生型毕赤酵母X33中的表达 | 第58-59页 |
| 3.改造大豆过氧化物酶活性中心Heme基团合成的代谢途径 | 第59页 |
| 4.糖基化位点的突变及诱导表达条件优化 | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 个人简历 | 第72-74页 |
