| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略词 | 第8-15页 |
| 第1章 前言 | 第15-34页 |
| 1.1 马流感病毒的概述 | 第15-21页 |
| 1.1.1 马流行性感冒的临床症状 | 第15页 |
| 1.1.2 马流感病毒基因组编码蛋白 | 第15页 |
| 1.1.3 马流感病毒的分类 | 第15-16页 |
| 1.1.4 马流感病毒的进化 | 第16-17页 |
| 1.1.5 马流感病毒的流行病学 | 第17-18页 |
| 1.1.6 国内的马流感病毒流行情况 | 第18-19页 |
| 1.1.7 马流感病毒的跨种传播 | 第19-20页 |
| 1.1.8 马流感疫苗 | 第20-21页 |
| 1.2 流感病毒反向遗传操作技术的概述 | 第21-24页 |
| 1.2.1 Ⅰ型RNA聚合酶启动子 | 第22页 |
| 1.2.2 病毒RNA3’端的精确终止 | 第22-23页 |
| 1.2.3 转染所需质粒的种类和数目 | 第23页 |
| 1.2.4 转染所用的细胞系 | 第23-24页 |
| 1.2.5 反向遗传系统在马流感研究上的应用 | 第24页 |
| 1.3 抗病毒蛋白IFITM的概述 | 第24-29页 |
| 1.3.1 IFITM蛋白分类 | 第25页 |
| 1.3.2 IFITM蛋白抗病毒作用的发现历程 | 第25-26页 |
| 1.3.3 IFITM蛋白对多种病毒有限制作用 | 第26-27页 |
| 1.3.4 动物源IFITM蛋白的抗流感作用 | 第27-29页 |
| 1.4 马群中新发黄病毒科病毒的研究进展 | 第29-32页 |
| 1.4.1 EHCV | 第29-30页 |
| 1.4.2 EPg V | 第30-31页 |
| 1.4.3 TDAV | 第31-32页 |
| 1.5 研究的目的与意义 | 第32-34页 |
| 第2章 马Ⅰ型RNA聚合酶启动子的克隆及应用 | 第34-59页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 材料 | 第34-36页 |
| 2.2.1 病毒株、细胞、质粒以及鸡胚 | 第34页 |
| 2.2.2 主要试剂及耗材 | 第34-35页 |
| 2.2.3 主要溶液配制 | 第35-36页 |
| 2.2.4 主要仪器及设备 | 第36页 |
| 2.3 方法 | 第36-50页 |
| 2.3.1 病毒纯化及传代 | 第36-37页 |
| 2.3.2 RNA提取及c DNA合成 | 第37-38页 |
| 2.3.3 马肺细胞基因组DNA提取 | 第38页 |
| 2.3.4 PCR产物的回收与纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.5 目的基因产物的连接、转化 | 第39-40页 |
| 2.3.6 阳性克隆的鉴定及测序 | 第40页 |
| 2.3.7 质粒大量提取 | 第40-41页 |
| 2.3.8 马Ⅰ型RNA聚合酶启动子的克隆 | 第41页 |
| 2.3.9 马Ⅰ型RNA聚合酶启动子驱动的荧光素酶报告质粒的构建 | 第41-45页 |
| 2.3.10 马Ⅰ型RNA聚合酶启动子发挥转录活性所需要的片段长度 | 第45-46页 |
| 2.3.11 马Ⅰ型RNA聚合酶启动子的种属特异性 | 第46页 |
| 2.3.12 EIV在马源细胞上的聚合酶活性 | 第46页 |
| 2.3.13 构建表达马Mx A蛋白的真核表达载体 | 第46-47页 |
| 2.3.14 马Mx A蛋白在马皮细胞中的定位 | 第47页 |
| 2.3.15 马Mx A蛋白在A549细胞中的定位 | 第47页 |
| 2.3.16 马Mx A蛋白对流感病毒聚合酶活性的限制作用 | 第47-48页 |
| 2.3.17 马BST2蛋白在在A549细胞中的定位 | 第48页 |
| 2.3.18 马BST2蛋白对流感病毒聚合酶活性的影响 | 第48页 |
| 2.3.19 EIV在马肺细胞上的拯救 | 第48-49页 |
| 2.3.20 细胞半数感染量的测定 | 第49-50页 |
| 2.3.21 数据统计 | 第50页 |
| 2.4 结果 | 第50-58页 |
| 2.4.1 马源Ⅰ型RNA聚合酶启动子及其转录位点的确定 | 第50-52页 |
| 2.4.2 马源Ⅰ型RNA聚合酶启动子序列的克隆 | 第52-53页 |
| 2.4.3 马Ⅰ型RNA聚合酶启动子发挥最大转录活性所需长度的确定 | 第53-54页 |
| 2.4.4 马Ⅰ型RNA聚合酶启动子的种属特异性 | 第54-55页 |
| 2.4.5 荧光素酶报告基因EIV小基因组复制实验 | 第55页 |
| 2.4.6 马Mx A蛋白影响EIV聚合酶活性 | 第55-57页 |
| 2.4.7 马BST2蛋白影响不EIV聚合酶活性 | 第57页 |
| 2.4.8 EIV野毒株及突变毒株的拯救 | 第57-58页 |
| 2.5 小结 | 第58-59页 |
| 第3章 马IFITM蛋白对流感病毒的限制作用 | 第59-80页 |
| 3.1 引言 | 第59页 |
| 3.2 材料 | 第59页 |
| 3.3 方法 | 第59-68页 |
| 3.3.1 Western blot检测蛋白表达 | 第59-61页 |
| 3.3.2 流感病毒蚀斑实验 | 第61-62页 |
| 3.3.3 测定EHV-1 TCID50 | 第62页 |
| 3.3.4 马IFITM基因位置的确定及克隆 | 第62-64页 |
| 3.3.5 表达IFITM蛋白真核表达载体的构建及验证 | 第64-65页 |
| 3.3.6 马组织中IFITM m RNA表达水平 | 第65-66页 |
| 3.3.7 处理马源细胞后，IFITM m RNA表达水平 | 第66-67页 |
| 3.3.8 表达马源IFITM蛋白MDCK细胞系的筛选 | 第67-68页 |
| 3.3.9 利用Ⅰ型RNA聚合酶启动子研究过量表达马源IFITM蛋白时，流感病毒的复制能力 | 第68页 |
| 3.3.10 利用Ⅰ型RNA聚合酶启动子研究稳定表达马源IFITM蛋白时，流感病毒的复制能力 | 第68页 |
| 3.4 结果 | 第68-79页 |
| 3.4.1 马IFITM蛋白的进化分析 | 第68-69页 |
| 3.4.2 马IFITM蛋白氨基酸的比对分析 | 第69-70页 |
| 3.4.3 马IFITM基因的染色体排列方式 | 第70页 |
| 3.4.4 马IFITMm RNA在马源细胞中表达水平 | 第70-71页 |
| 3.4.5 马IFITM受干扰素诱导表达 | 第71页 |
| 3.4.6 EIV及EHV-1 感染后，马IFITM m RNA表达水平 | 第71-73页 |
| 3.4.7 马IFITM m RNA在组织中表达水平 | 第73-74页 |
| 3.4.8 马源IFITM蛋白的表达与鉴定 | 第74页 |
| 3.4.9 马IFITM蛋白的细胞定位 | 第74-76页 |
| 3.4.10 表达IFITM蛋白的MDCK细胞系筛选与鉴定 | 第76-78页 |
| 3.4.11 利用Ⅰ型RNA聚合酶启动子研究过量表达马IFITM蛋白，对流感病毒复制的影响 | 第78-79页 |
| 3.4.12 利用Ⅰ型RNA聚合酶启动子研究稳定表达马IFITM蛋白，对流感病毒复制的影响 | 第79页 |
| 3.5 小结 | 第79-80页 |
| 第4章 国内马群中新发黄病毒的分子流行病学调查 | 第80-87页 |
| 4.1 引言 | 第80页 |
| 4.2 材料 | 第80页 |
| 4.3 方法 | 第80-83页 |
| 4.3.1 样品采集 | 第80页 |
| 4.3.2 RNA提取及c DNA合成 | 第80-81页 |
| 4.3.3 PCR检测及测序 | 第81-83页 |
| 4.3.4 进化树分析 | 第83页 |
| 4.4 结果 | 第83-86页 |
| 4.4.1 马属动物血清样品中病毒RNA检测结果 | 第83-84页 |
| 4.4.2 病毒的进化分析 | 第84-86页 |
| 4.5 小结 | 第86-87页 |
| 第5章 全文讨论与总结 | 第87-93页 |
| 5.1 关于马Ⅰ型RNA聚合酶的研究 | 第87-88页 |
| 5.2 关于马IFITM蛋白抗流感的研究 | 第88-90页 |
| 5.3 关于马群中新发病毒的分子流行病学研究 | 第90-92页 |
| 5.4 全文总结 | 第92-93页 |
| 5.4.1 马Ⅰ型聚合酶启动子的研究 | 第92页 |
| 5.4.2 马IFITM蛋白的抗流感作用的研究 | 第92页 |
| 5.4.3 对国内马群中三种新发黄病毒科病毒的流行病学调查 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 附录A：质粒图谱 | 第104-105页 |
| 附录B：攻读博士期间发表文章 | 第105页 |
