| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1. 生物防治概论 | 第11-13页 |
| 1.1 拮抗酵母菌的作用机制 | 第11-12页 |
| 1.2 提高酵母拮抗性的方法 | 第12页 |
| 1.3 ROS与果蔬采后病害 | 第12-13页 |
| 2. 自噬研究进展 | 第13-16页 |
| 2.1 线粒体巨自噬途径 | 第14页 |
| 2.2 酿酒酵母中的自噬 | 第14-16页 |
| 2.2.1 非选择性自噬 | 第14页 |
| 2.2.2 选择性自噬 | 第14-16页 |
| 2.3 自噬在酵母中的功能 | 第16页 |
| 2.4 ROS与自噬 | 第16页 |
| 3. 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 4. 研究的创新性 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-34页 |
| 1. 实验仪器、材料与试剂 | 第19-26页 |
| 1.1 菌种来源 | 第19页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 1.3 主要试剂及试剂盒 | 第20-21页 |
| 1.4 培养基配方 | 第21-22页 |
| 1.5 溶液配方 | 第22-25页 |
| 1.5.1 缓冲液配方 | 第22-23页 |
| 1.5.2 RNA提取试剂配制 | 第23页 |
| 1.5.3 显色试剂配制 | 第23-24页 |
| 1.5.4 酵母自噬相关试剂 | 第24-25页 |
| 1.6 引物 | 第25-26页 |
| 2. 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.1 酿酒酵母与病原菌拮抗实验 | 第26页 |
| 2.1.1 离体实验 | 第26页 |
| 2.1.2 活体实验 | 第26页 |
| 2.2 酿酒酵母的发酵培养 | 第26页 |
| 2.3 酿酒酵母生长处理 | 第26-27页 |
| 2.4 酿酒酵母生长情况检测 | 第27-29页 |
| 2.4.1 葡萄糖消耗速率 | 第27-28页 |
| 2.4.2 酒精产率 | 第28-29页 |
| 2.5 酿酒酵母生理指标检测 | 第29-30页 |
| 2.5.1 死亡率(PI染色法) | 第29-30页 |
| 2.5.2 活性氧含量检测 | 第30页 |
| 2.6 酿酒酵母基因表达量检测 | 第30-34页 |
| 2.6.1 酵母基因组RNA提取 | 第30-31页 |
| 2.6.2 RNA的检测 | 第31页 |
| 2.6.3 反转录合成酵母cDNA | 第31-32页 |
| 2.6.4 酵母自噬基因实时荧光定量PCR检测 | 第32-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-82页 |
| 1. 自噬在酿酒酵母拮抗果蔬采后病菌中的作用 | 第34-41页 |
| 1.1 自噬在酿酒酵母拮抗匍枝根霉中的作用 | 第34-36页 |
| 1.1.1 不同浓度酿酒酵母对匍枝根霉的拮抗作用 | 第34-35页 |
| 1.1.2 自噬对酿酒酵母拮抗匍枝根霉的影响 | 第35-36页 |
| 1.2 自噬在酿酒酵母拮抗灰葡萄孢菌中的作用 | 第36-37页 |
| 1.2.1 不同浓度酿酒酵母对灰葡萄孢菌的拮抗作用 | 第36页 |
| 1.2.2 自噬对酿酒酵母拮抗灰葡萄孢菌的影响 | 第36-37页 |
| 1.3 自噬在酿酒酵母拮抗茄链格孢菌中的作用 | 第37-39页 |
| 1.3.1 不同浓度酿酒酵母对茄链格孢菌的拮抗作用 | 第38页 |
| 1.3.2 自噬对酿酒酵母拮抗茄链格孢菌的影响 | 第38-39页 |
| 1.4 自噬在酿酒酵母拮抗苹果炭疽菌中的作用 | 第39-41页 |
| 1.4.1 不同浓度酿酒酵母对苹果炭疽菌的拮抗作用 | 第40页 |
| 1.4.2 自噬对酿酒酵母拮抗苹果炭疽菌的作用 | 第40-41页 |
| 2. 活体实验 | 第41-48页 |
| 2.1 不同浓度酿酒酵母对果蔬采后病菌的活体拮抗作用 | 第41-45页 |
| 2.1.1 不同浓度酿酒酵母对苹果炭疽菌的活体拮抗作用 | 第41-43页 |
| 2.1.2 不同浓度酿酒酵母对灰葡萄孢菌的活体拮抗作用 | 第43-44页 |
| 2.1.3 不同浓度酿酒酵母对茄链格孢菌的活体拮抗作用 | 第44页 |
| 2.1.4 不同浓度酿酒酵母对匍枝根霉的活体拮抗作用 | 第44-45页 |
| 2.2 自噬对酿酒酵母拮抗果蔬采后病菌活体接种的作用 | 第45-48页 |
| 2.2.1 自噬对酿酒酵母拮抗苹果炭疽菌活体接种的作用 | 第45-46页 |
| 2.2.2 自噬对酿酒酵母拮抗灰葡萄孢菌活体接种的作用 | 第46-47页 |
| 2.2.3 自噬对酿酒酵母拮抗茄链格孢菌活体接种的作用 | 第47-48页 |
| 3. 自噬在酿酒酵母乙醇产生中的作用 | 第48-51页 |
| 3.1 自噬对酿酒酵母消耗葡萄糖的影响 | 第49-50页 |
| 3.1.1 巨自噬对酿酒酵母发酵过程中葡萄糖消耗的影响 | 第49页 |
| 3.1.2 线粒体自噬对酿酒酵母发酵过程中葡萄糖消耗的影响 | 第49-50页 |
| 3.2 自噬对酿酒酵母发酵过程中产乙醇能力的影响 | 第50-51页 |
| 3.2.1 巨自噬对酿酒酵母产乙醇能力的影响 | 第50-51页 |
| 4. ROS在酿酒酵母发酵过程中的作用 | 第51-59页 |
| 4.1 GSH、NAC对ROS含量的影响 | 第51-53页 |
| 4.1.1 GSH、NAC对O_2~-的清除作用鉴定 | 第51-52页 |
| 4.1.2 GSH、NAC对H_2O_2含量影响 | 第52-53页 |
| 4.2 GSH、NAC对酿酒酵母的葡萄糖消耗速率的影响 | 第53-54页 |
| 4.3 GSH、NAC对酿酒酵母产乙醇能力的影响 | 第54-55页 |
| 4.4 GSH、NAC对乙醇胁迫条件下酿酒酵母死亡率的影响 | 第55页 |
| 4.5 自噬基因表达量检测 | 第55-59页 |
| 4.5.1 RNA提取结果 | 第55-56页 |
| 4.5.2 自噬基因荧光定量PCR结果 | 第56-59页 |
| 5. 抗氧化物酶抑制剂对乙醇胁迫酿酒酵母的作用 | 第59-67页 |
| 5.1 确定 2-ME和 3-AT的使用浓度 | 第59-60页 |
| 5.2 2-ME、3-AT对葡萄糖消耗速率的影响 | 第60-61页 |
| 5.3 2-ME、3-AT对酿酒酵母的产乙醇能力的影响 | 第61页 |
| 5.4 2-ME、3-AT对酿酒酵母细胞死亡率的影响 | 第61-62页 |
| 5.5 2-ME、3-AT对乙醇胁迫酿酒酵母胞内ROS含量的影响 | 第62-64页 |
| 5.5.1 2-ME、3-AT对乙醇胁迫酿酒酵母胞内O_2~-含量的影响 | 第62-63页 |
| 5.5.2 2-ME、3-AT对乙醇胁迫酿酒酵母胞内H_2O_2含量的影响 | 第63-64页 |
| 5.6 自噬基因表达量检测 | 第64-67页 |
| 5.6.1 RNA提取结果 | 第64-65页 |
| 5.6.2 荧光定量PCR结果 | 第65-67页 |
| 6.呼吸链抑制剂对对乙醇胁迫酿酒酵母的影响 | 第67-75页 |
| 6.1 确定Antimycin A、Rotenone的使用浓度 | 第67-69页 |
| 6.2 Antimycin A、Rotenone对酿酒酵母葡萄糖消耗速率的影响 | 第69页 |
| 6.3 Antimycin A、Rotenone对酿酒酵母产乙醇能力的影响 | 第69-70页 |
| 6.4 Antimycin A、Rotenone对乙醇胁迫酿酒酵母死亡率的影响 | 第70-71页 |
| 6.5 Antimycin A、Rotenone对乙醇胁迫酿酒酵母胞内ROS含量的影响 | 第71-73页 |
| 6.5.1 Antimycin A、Rotenone对乙醇胁迫酿酒酵母胞内O_2~-含量的影响 | 第71-72页 |
| 6.5.2 Antimycin A、Rotenone对乙醇胁迫酿酒酵母胞内H_2O_2含量的影响 | 第72-73页 |
| 6.6 Antimycin A、Rotenone对乙醇胁迫下酿酒酵母自噬基因表达量的影响 | 第73-75页 |
| 6.6.1 酿酒酵母RNA提取结果 | 第73页 |
| 6.6.2 荧光定量PCR结果 | 第73-75页 |
| 7. 自噬诱导剂/自噬抑制剂对乙醇胁迫酿酒酵母的影响 | 第75-82页 |
| 7.1 Rapamycin、3-MA对乙醇胁迫酿酒酵母自噬基因表达的影响 | 第75-79页 |
| 7.1.1 酿酒酵母RNA提取结果 | 第75-76页 |
| 7.1.2 荧光定量PCR结果 | 第76-79页 |
| 7.1.2.1 Rapamycin、3-MA对乙醇胁迫酿酒酵母巨自噬基因表达的影响 | 第76-79页 |
| 7.2 Rapamycin、3-MA对乙醇胁迫酿酒酵母死亡率的影响 | 第79-80页 |
| 7.3 Rapamycin、3-MA对乙醇胁迫酿酒酵母胞内ROS含量的影响 | 第80-82页 |
| 7.3.1 Rapamycin、3-MA对乙醇胁迫酿酒酵母胞内O_2~-含量的影响 | 第80页 |
| 7.3.2 Rapamycin、3-MA对乙醇胁迫酿酒酵母胞内H_2O_2含量的影响 | 第80-82页 |
| 第四章 结论与展望 | 第82-85页 |
| 1.第一部分 | 第82-83页 |
| 2.第二部分 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 个人简介 | 第91页 |
