| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-12页 |
| 1.1 模式生物——粟酒裂殖酵母 | 第7页 |
| 1.2 MAPK级联信号途径 | 第7-8页 |
| 1.3 酵母对氧化物刺激的反应 | 第8-9页 |
| 1.4 DJ-1基因的研究进展 | 第9-10页 |
| 1.5 课题内容和展望 | 第10-12页 |
| 第二章 敲除菌的构建与制备抗体 | 第12-42页 |
| 2.1 材料与培养基 | 第12-16页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第12-14页 |
| 2.1.2 培养基与试剂 | 第14-16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-26页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第16-18页 |
| 2.2.2 原核高表达Hsp3101重组蛋白并制作抗体 | 第18-23页 |
| 2.2.3 hsp3102-3105基因组原位加标签实验 | 第23-26页 |
| 2.2.4 敲基因方法 | 第26页 |
| 2.3 实验结果 | 第26-40页 |
| 2.3.1 原核表达质粒pET28a-hsp3101构建 | 第26-27页 |
| 2.3.2 重组Hsp3101蛋白的原核表达 | 第27-29页 |
| 2.3.3 SpDJ-1及其同源基因原位加myc标签 | 第29-31页 |
| 2.3.4 人DJ-1同源基因的敲除 | 第31-40页 |
| 2.4 实验讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 DJ-1同源基因的表达与转录调控研究 | 第42-62页 |
| 3.1 材料与培养基 | 第42-43页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第42页 |
| 3.1.2 培养基与试剂 | 第42-43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-50页 |
| 3.2.1 本章所用到的引物 | 第43-44页 |
| 3.2.2 酵母存活率测定 | 第44页 |
| 3.2.3 酵母蛋白提取 | 第44-45页 |
| 3.2.4 ECL-western blot检测SpDJ-1及其同源基因的表达水平 | 第45页 |
| 3.2.5 S.pombe总RNA提取 | 第45-46页 |
| 3.2.6 SpDJ-1转录起始位点测定 | 第46-48页 |
| 3.2.7 融合PCR方法构建SpDJ-1上游启动子截短质粒 | 第48-49页 |
| 3.2.8 绘制标准曲线 | 第49页 |
| 3.2.9 报告基因lacZ酶活检测 | 第49-50页 |
| 3.3 实验结果 | 第50-61页 |
| 3.3.1 SpDJ-1及Hsp3101的表达水平检测 | 第50-51页 |
| 3.3.2 SpDJ-1及其同源基因敲除菌的生长表型 | 第51-53页 |
| 3.3.3 SpDJ-1受到Sty1信号通路的调控 | 第53页 |
| 3.3.4 SpDJ-1转录起始位点检测 | 第53-57页 |
| 3.3.5 信息学分析SpDJ-1启动子的上游顺式作用元件 | 第57-59页 |
| 3.3.6 实验分析SpDJ-1启动子的上游顺式作用元件 | 第59-61页 |
| 3.4 结果讨论 | 第61-62页 |
| 全文总结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 硕士期间发表的成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
