缩略语表 | 第6-8页 |
中文摘要 | 第8-11页 |
英文摘要 | 第11-13页 |
前言 | 第14-15页 |
文献回顾 | 第15-26页 |
第一部分 重组表达质粒pET 30a-SA-ECD的构建 | 第26-41页 |
引言 | 第26页 |
1 材料 | 第26-28页 |
1.1 载体 | 第26-27页 |
1.2 菌种 | 第27页 |
1.3 主要试剂及缓冲液 | 第27页 |
1.4 常用培养基、琼脂糖凝胶及其配制方法 | 第27-28页 |
1.5 主要仪器 | 第28页 |
2 方法 | 第28-34页 |
2.1 目的基因的设计 | 第28-32页 |
2.2 载体的准备 | 第32-33页 |
2.3 载体与目的基因连接 | 第33页 |
2.4 重组质粒鉴定 | 第33-34页 |
3 结果 | 第34-39页 |
3.1 目的基因鉴定 | 第34-36页 |
3.2 重组表达质粒的鉴定结果 | 第36-39页 |
4 讨论 | 第39-41页 |
第二部分 融合蛋白SA-ECD的表达与纯化 | 第41-51页 |
引言 | 第41页 |
1 材料 | 第41-42页 |
1.1 菌种 | 第41页 |
1.2 主要试剂、缓冲液 | 第41-42页 |
1.3 常用试剂、缓冲液及培养基的配制方法 | 第42页 |
1.4 主要仪器 | 第42页 |
2 方法 | 第42-46页 |
2.1 融合蛋白的诱导表达及Western-blot初步鉴定 | 第42-44页 |
2.2 融合蛋白的大量诱导表达及其纯化、鉴定 | 第44-45页 |
2.3 Bradford法测定蛋白浓度 | 第45-46页 |
3 结果 | 第46-49页 |
3.1 成功表达并初步鉴定融合蛋白SA-ECD | 第46-47页 |
3.2 成功纯化并鉴定融合蛋白SA-ECD | 第47-48页 |
3.3 蛋白浓度测定 | 第48-49页 |
4 讨论 | 第49-51页 |
第三部分 靶向系统的构建及其抗前列腺癌功能的初步研究 | 第51-66页 |
引言 | 第51页 |
1 材料 | 第51-52页 |
1.1 细胞 | 第51页 |
1.2 主要试剂 | 第51-52页 |
1.3 主要仪器 | 第52页 |
2 方法 | 第52-56页 |
2.1 靶向系统的构建 | 第52-53页 |
2.2 电泳迁移率试验(EMSA) | 第53-54页 |
2.3 CCK-8 法检测细胞存活率 | 第54页 |
2.4 细胞凋亡检测 | 第54页 |
2.5 台盼兰染色法鉴定细胞活力 | 第54-55页 |
2.6 形态学观察 | 第55页 |
2.7 细胞自噬形态学观察 | 第55页 |
2.8 Western blot检测相关蛋白表达 | 第55-56页 |
2.9 统计学方法 | 第56页 |
3 结果 | 第56-64页 |
3.1 八聚精氨酸(R_8)能高效的穿过细胞膜 | 第56-57页 |
3.2 SA-ECD可特异性结合A10-biotin及biotin-NuBCP9R_8 | 第57-58页 |
3.3 靶向系统降低前列腺癌LNCaP细胞存活率 | 第58页 |
3.4 靶向系统促进前列腺癌LNCaP细胞凋亡 | 第58-60页 |
3.5 靶向系统降低PSMA(+)前列腺癌细胞活力 | 第60页 |
3.6 靶向系统破坏PSMA(+)前列腺癌细胞形态 | 第60-61页 |
3.7 靶向系统诱导前列腺癌LNCaP细胞发生自噬 | 第61-62页 |
3.8 靶向系统影响LNCaP细胞自噬及凋亡相关蛋白表达 | 第62-64页 |
4 讨论 | 第64-66页 |
小结 | 第66-67页 |
参考文献 | 第67-77页 |
个人简历和研究成果 | 第77-78页 |
致谢 | 第78页 |