| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1 研究问题由来 | 第12-13页 |
| 2 白细胞介素6的研究概况 | 第13-17页 |
| 2.1 白细胞介素6的发现和来源 | 第13-14页 |
| 2.2 白细胞介素6的分子结构 | 第14-15页 |
| 2.3 白细胞介素6的生物学活性 | 第15页 |
| 2.4 白细胞介素6在临床中的应用 | 第15-17页 |
| 2.4.1 作为多种疾病的临床诊断指标 | 第16-17页 |
| 2.4.2 对机体的免疫保护作用 | 第17页 |
| 3 研究的目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 团头鲂白细胞介素6基因的生物信息学分析及表达 | 第19-39页 |
| 1 前言 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.2 主要试剂耗材及仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.2.1 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.2.2 试剂盒及药品 | 第21页 |
| 2.2.3 主要试剂配制 | 第21页 |
| 2.3 总RNA提取和检测 | 第21-22页 |
| 2.4 c DNA第一条链的合成 | 第22-23页 |
| 2.5 目的基因序列验证及定量引物专一性检测 | 第23-24页 |
| 2.5.1 PCR扩增反应 | 第23页 |
| 2.5.2 PCR产物回收与纯化 | 第23-24页 |
| 2.5.3 连接转化 | 第24页 |
| 2.5.4 阳性克隆的筛选 | 第24页 |
| 2.6 Mam IL-6 基因的序列分析 | 第24-25页 |
| 2.7 荧光定量PCR反应检测Mam IL-6 基因表达 | 第25-26页 |
| 2.8 数据分析 | 第26页 |
| 3 结果 | 第26-36页 |
| 3.1 Mam IL-6 基因的序列分析 | 第26-33页 |
| 3.1.1 Mam IL-6 序列的生物信息学分析 | 第26-28页 |
| 3.1.2 IL-6 氨基酸序列比对和进化分析 | 第28-32页 |
| 3.1.3 Mam IL-6 的基因结构分析 | 第32-33页 |
| 3.2 Mam IL-6 的组织差异表达 | 第33-34页 |
| 3.3 嗜水气单胞菌感染对Mam IL-6 基因表达的影响 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36-39页 |
| 第三章 Mam IL-6 基因启动子缺失突变体的构建与活性分析 | 第39-53页 |
| 1 前言 | 第39-40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第40页 |
| 2.2 主要试剂耗材及仪器设备 | 第40-41页 |
| 2.2.1 载体构建主要试剂 | 第40页 |
| 2.2.2 细胞培养及转染主要试剂 | 第40页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第40-41页 |
| 2.3 团头鲂基因组DNA的提取 | 第41页 |
| 2.4 Mam IL-6 启动子生物信息学分析 | 第41-42页 |
| 2.4.1 Mam IL-6 启动子序列的扩增 | 第41页 |
| 2.4.2 转录起始位点与TATA box预测软件及网址 | 第41页 |
| 2.4.3 转录因子结合位点预测软件及网址 | 第41-42页 |
| 2.5 构建克隆载体p Blue-T-IL-6 | 第42页 |
| 2.6 构建重组质粒p GL3-IL-6 | 第42-44页 |
| 2.6.1 双酶切 | 第42-43页 |
| 2.6.2 酶切产物的纯化回收 | 第43页 |
| 2.6.3 酶切后目的片段与p GL3-basic载体的连接 | 第43页 |
| 2.6.4 转化及阳性克隆的鉴定 | 第43页 |
| 2.6.5 高纯度质粒的提取 | 第43-44页 |
| 2.7 细胞培养与质粒转染 | 第44-45页 |
| 2.8 LPS对IL-6 基因启动子的诱导 | 第45页 |
| 2.9 双荧光素酶报告基因检测及数据分析 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-50页 |
| 3.1 Mam IL-6 基因启动子分析 | 第45-47页 |
| 3.1.1 Mam IL-6 转录因子结合位点预测结果 | 第45-47页 |
| 3.1.2 不同物种IL-6 基因近端启动子的分析结果 | 第47页 |
| 3.2 Mam IL-6 基因系列p GL3重组载体的构建及电泳鉴定结果 | 第47-49页 |
| 3.3 Mam IL-6 基因系列启动子缺失体活性测定 | 第49页 |
| 3.4 LPS处理对Mam IL-6 系列启动子缺失体活性的影响 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 参考文献 | 第53-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
