| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 1 材料与方法 | 第18-36页 |
| 1.1 试验材料 | 第18-21页 |
| 1.1.1 供试菌株 | 第18页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第18页 |
| 1.1.3 仪器设备 | 第18-19页 |
| 1.1.4 试验所需主要溶液配置 | 第19-21页 |
| 1.2 试验方法 | 第21-36页 |
| 1.2.1 菌丝培养 | 第21页 |
| 1.2.2 菌丝体收集 | 第21-22页 |
| 1.2.3 菌丝体总RNA的提取及检测 | 第22页 |
| 1.2.4 酸性蛋白酶基因片段的克隆 | 第22-24页 |
| 1.2.5 RACE扩增酸性蛋白酶的基因全长 | 第24-27页 |
| 1.2.6 酸性蛋白酶基因cDNA全长的克隆 | 第27-28页 |
| 1.2.7 酸性蛋白酶基因的生物信息学分析 | 第28页 |
| 1.2.8 酸性蛋白酶基因的原核表达 | 第28-31页 |
| 1.2.9 重组蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 1.2.10 重组蛋白的定量分析 | 第32页 |
| 1.2.11 重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第32-33页 |
| 1.2.12 间接ELISA效价检测 | 第33页 |
| 1.2.13 棋盘滴定法 | 第33-34页 |
| 1.2.14 抗体验证分析 | 第34-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-54页 |
| 2.1 酸性蛋白酶基因全长的克隆 | 第36-38页 |
| 2.1.1 桦褐孔菌总RNA的提取 | 第36页 |
| 2.1.2 酸性蛋白酶基因cDNA片段的克隆 | 第36-37页 |
| 2.1.3 酸性蛋白酶基因的3' RACE和5'RACE克隆 | 第37-38页 |
| 2.1.4 酸性蛋白酶基因全长的克隆 | 第38页 |
| 2.2 酸性蛋白酶基因的生物信息学分析 | 第38-44页 |
| 2.2.1 酸性蛋白酶基因cDNA全长序列分析 | 第38-39页 |
| 2.2.2 酸性蛋白酶氨基酸序列比对分析 | 第39-41页 |
| 2.2.3 酸性蛋白酶的理化特性及信号肽 | 第41-42页 |
| 2.2.4 酸性蛋白酶的保守结构域和功能域分析 | 第42-43页 |
| 2.2.5 酸性蛋白酶的二级结构预测 | 第43页 |
| 2.2.6 酸性蛋白酶的三级结构预测 | 第43-44页 |
| 2.3 酸性蛋白酶的原核表达 | 第44-50页 |
| 2.3.1 酸性蛋白酶基因的克隆 | 第44-45页 |
| 2.3.2 重组质粒pMD-18T-IO-AP PCR鉴定结果 | 第45-46页 |
| 2.3.3 重组质粒pMD-18T-IO-AP双酶切鉴定结果 | 第46页 |
| 2.3.4 重组质粒pMD-18T-IO-AP测序结果 | 第46-47页 |
| 2.3.5 重组质粒pGEX-4T1-IO-AP PCR鉴定结果 | 第47-48页 |
| 2.3.6 重组质粒pGEX-4T1-IO-AP双酶切鉴定结果 | 第48页 |
| 2.3.7 酸性蛋白酶原核表达载体构建 | 第48-49页 |
| 2.3.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果 | 第49-50页 |
| 2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析纯化结果 | 第50-51页 |
| 2.5 重组蛋白定量分析结果 | 第51页 |
| 2.6 间接ELISA检测 | 第51-52页 |
| 2.7 棋盘滴定结果 | 第52-53页 |
| 2.8 抗体验证分析结果 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
