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鸭源H9N2亚型AIV分离鉴定与荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

中文摘要第8-10页
Abstract第10-12页
1.前言第13-22页
    1.1 病原学第13-17页
        1.1.1 禽流感的形态与结构第13页
        1.1.2 禽流感编码的蛋白及其功能第13-17页
    1.2 禽流感病毒的变异第17页
    1.3 禽流感病毒流行病学第17-18页
        1.3.1 H9N2亚型AIV流行状况第17页
        1.3.2 H9N2亚型AIV在水禽中流行现状第17-18页
    1.4 禽流感病毒的检测方法第18页
    1.5 实时荧光定量PCR研究进展第18-21页
        1.5.1 实时荧光定量PCR基本原理第18-19页
        1.5.2 实时荧光定量PCR的分类第19-20页
        1.5.3 荧光定量PCR的定量方法第20-21页
        1.5.4 荧光定量RT-PCR在畜牧生产中的应用第21页
    1.6 本研究的目的和意义第21-22页
2.材料与方法第22-31页
    2.1 材料第22-23页
        2.1.1 病毒与实验动物第22页
        2.1.2 主要试剂及化学药品第22页
        2.1.3 主要仪器第22-23页
    2.2 方法第23-31页
        2.2.1 H9N2亚型AIV的分离鉴定第23页
        2.2.2 H9N2亚型AIV的生物学特性分析第23-24页
        2.2.3 H9N2亚型AIV的全基因组测序第24-28页
        2.2.4 SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测H9N2亚型AIV(JN1株)HA基因方法的建立第28-30页
        2.2.5 H9N2亚型AIV感染樱桃谷雏鸭后排毒规律及各组织病毒载量第30-31页
3.结果第31-46页
    3.1 H9N2亚型AIV的分离鉴定第31页
    3.2 生物学特性分析第31-32页
        3.2.1 鸡胚半数感染量(EID_(50))测定结果第31-32页
        3.2.2 鸡胚平均致死时间(MDT)测定结果第32页
        3.2.3 静脉致病指数(IVPI) 测定结果第32页
        3.2.4 抗原差异性分析第32页
    3.3 全基因分析第32-37页
        3.3.1 分离毒株基因组PCR扩增结果第32页
        3.3.2 全基因核酸序列比较第32-36页
        3.3.3 HA基因上关键氨基酸位点分析第36页
        3.3.4 NA上关键氨基酸位点分析第36-37页
        3.3.5 PB2、PB1和PA基因的序列分析第37页
        3.3.6 M、NP、和NS基因的序列分析第37页
    3.4 H9N2亚型AIV荧光定量PCR检测方法的建立与应用第37-42页
        3.4.1 荧光定量PCR引物特异性第37-38页
        3.4.2 荧光定量反应条件的优化第38页
        3.4.3 荧光定量PCR检测HA基因标准曲线的建立第38-39页
        3.4.4 特异性试验结果第39-40页
        3.4.5 敏感性检测结果第40-41页
        3.4.6 重复性试验结果第41页
        3.4.7 动物实验样品的检测第41-42页
    3.5 H9N2亚型AIV(JN1株)感染樱桃谷雏鸭后排毒规律及各组织病毒载量第42-46页
        3.5.1 临床观察结果第42页
        3.5.2 樱桃谷雏鸭感染H9N2亚型AIV后的排毒规律第42-43页
        3.5.3 剖检病变第43-44页
        3.5.4 组织病理切片观察第44页
        3.5.5 雏鸭感染JN1株AIV病毒后各组织器官中病毒载量的变化第44-45页
        3.5.6 攻毒样品血清抗体水平检测第45-46页
4.讨论第46-49页
5.结论第49-50页
参考文献第50-57页
致谢第57-58页
硕士期间发表论文情况第58页

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