| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 神经酸的概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 神经酸的化学结构 | 第12页 |
| 1.1.2 神经酸的生物学活性 | 第12-13页 |
| 1.1.3 神经酸在预防和治疗脑病中的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 自然界中神经酸的来源 | 第14-15页 |
| 1.2.1 动物来源 | 第14页 |
| 1.2.2 植物来源 | 第14页 |
| 1.2.3 微生物来源 | 第14-15页 |
| 1.3 神经酸的合成 | 第15-16页 |
| 1.3.1 神经酸的化学合成 | 第15页 |
| 1.3.2 神经酸的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.4 KCS基因 | 第16-20页 |
| 1.4.1 KCS的分类 | 第16-19页 |
| 1.4.2 KCS的底物特异性 | 第19-20页 |
| 1.5 解脂耶罗维亚酵母（YARROWIA LIPOLYTICA） | 第20-21页 |
| 1.5.1 解脂耶罗维亚酵母的简介 | 第20页 |
| 1.5.2 硬脂酰辅酶A去饱和酶（stearoyl-coenzyme A desaturase, SCD） | 第20-21页 |
| 1.5.3 甘油二酯酰基转移酶（diacylglycerol acyltransferase, DGA1） | 第21页 |
| 1.6 本文立题依据和设计思路 | 第21-23页 |
| 1.6.1 研究背景和立题依据 | 第21-22页 |
| 1.6.2 研究方案 | 第22页 |
| 1.6.3 技术路线 | 第22页 |
| 1.6.4 研究目标 | 第22-23页 |
| 第二章 解脂耶罗维亚酵母URA3基因敲除菌株的构建 | 第23-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 实验步骤和方法 | 第24-28页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第24页 |
| 2.3.2 聚合酶链式反应（PCR） | 第24页 |
| 2.3.3 PCR产物的琼脂糖凝胶纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.4 重组质粒pUC-URA3YL的构建 | 第25页 |
| 2.3.5 重组质粒pUC-URA3YL的转化 | 第25页 |
| 2.3.6 重组质粒pUC-URA3YL的快速提取 | 第25-26页 |
| 2.3.7 重组质粒pUC-URA3YL的酶切鉴定 | 第26页 |
| 2.3.8 菌种的保藏与测序 | 第26页 |
| 2.3.9 重组质粒转化酵母 | 第26-27页 |
| 2.3.10 敲除掉URA3基因的解脂耶罗维亚酵母Po1g（URA3ˉ po1g）的初步验证 | 第27页 |
| 2.3.11 URA3ˉ po1g基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 2.3.12 URA3ˉ po1g的PCR鉴定和保藏 | 第27-28页 |
| 2.4 结果与分析 | 第28-30页 |
| 2.4.1 重组质粒pUC-URA3YL的序列测定 | 第28页 |
| 2.4.2 重组质粒pUC-URA3YL的线性化和Po1g（URA3ˉ po1g）的初步验证 | 第28-30页 |
| 2.4.3 URA3ˉ po1g基因组DNA的提取和PCR鉴定 | 第30页 |
| 2.5 本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 多基因表达载体的构建 | 第31-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第31页 |
| 3.2 实验仪器 | 第31-32页 |
| 3.3 实验步骤和方法 | 第32-37页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第32-33页 |
| 3.3.2 聚合酶链式反应(PCR) | 第33-35页 |
| 3.3.3 PCR产物的琼脂糖凝胶纯化 | 第35页 |
| 3.3.4 重组质粒的构建 | 第35页 |
| 3.3.5 重组质粒的转化 | 第35-36页 |
| 3.3.6 菌落PCR（colony PCR）扩增 | 第36页 |
| 3.3.7 重组质粒的快速提取 | 第36页 |
| 3.3.8 重组质粒的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.9 菌种的保藏与测序 | 第37页 |
| 3.4 结果与分析 | 第37-42页 |
| 3.4.1 目标片段的PCR扩增 | 第37-38页 |
| 3.4.2 Colony PCR扩增 | 第38页 |
| 3.4.3 重组质粒的酶切验证 | 第38-40页 |
| 3.4.4 重组质粒的序列测定 | 第40-42页 |
| 3.5 本章小结 | 第42-44页 |
| 第四章 多基因表达质粒转化URA3ˉ PO1G | 第44-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.2 实验仪器 | 第44-45页 |
| 4.3 实验步骤和方法 | 第45-47页 |
| 4.3.1 重组质粒的快速提取 | 第45页 |
| 4.3.2 重组质粒的线性化 | 第45页 |
| 4.3.3 重组质粒转化酵母 | 第45页 |
| 4.3.4 导入重组质粒的URA3ˉ po1g的初步验证和colony PCR检测 | 第45-46页 |
| 4.3.5 导入重组质粒的URA3ˉ po1g的保藏 | 第46页 |
| 4.3.6 导入重组质粒的URA3ˉ po1g的产油培养 | 第46页 |
| 4.3.7 脂肪酸提取 | 第46页 |
| 4.3.8 脂肪酸甲脂化 | 第46页 |
| 4.3.9 气相色谱分析脂肪酸成分 | 第46-47页 |
| 4.4 结果与分析 | 第47-57页 |
| 4.4.1 重组质粒线性化 | 第47-48页 |
| 4.4.2 Colony PCR扩增 | 第48-49页 |
| 4.4.3 导入重组质粒的URA3ˉ po1g重组菌株 | 第49-51页 |
| 4.4.4 脂肪酸提取 | 第51-52页 |
| 4.4.5 气相色谱（GC）和气相-质谱（GC-MS）的结果与分析 | 第52-55页 |
| 4.4.6 不同基因对URA3ˉ Po1g脂肪酸成分的影响 | 第55-56页 |
| 4.4.7 不同重组菌株脂肪酸成分的对比分析 | 第56-57页 |
| 4.5 本章小结 | 第57-58页 |
| 第五章 结果与讨论 | 第58-60页 |
| 5.1 研究结果 | 第58页 |
| 5.2 存在的问题 | 第58-59页 |
| 5.3 本文的创新点 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录 | 第65-70页 |
| 缩略词 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
