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团头鲂甘露糖受体CTLD4-8结构域抗体制备及功能分析

摘要第7-8页
Abstract第8-9页
缩略词表第10-12页
第一章 文献综述第12-21页
    1 MR的结构第13-15页
        1.1 CR结构域第13-14页
        1.2 FNⅡ结构域第14页
        1.3 CTLD结构域第14-15页
        1.4 胞质尾区第15页
    2 MR的分布与调控第15-16页
    3 MR的功能第16-19页
        3.1 MR维持内环境稳态第16页
        3.2 MR参与多种微生物的识别第16-17页
        3.3 MR参与抗原递呈第17-18页
        3.4 MR和细胞动力学第18页
        3.5 MR与细胞内信号转导第18-19页
    4 鱼类MR研究进展及展望第19-21页
第二章 甘露糖受体CTLD4-8 结构域的原核表达及抗体制备第21-35页
    1 材料与方法第21-29页
        1.1 材料第21-22页
            1.1.1 实验动物第21页
            1.1.2 主要试剂第21-22页
            1.1.3 主要实验仪器及设备第22页
        1.2 方法第22-29页
            1.2.1 主要溶液配制第22-24页
            1.2.2 目的基因扩增第24-25页
            1.2.3 pGEM-CTLD4-8 克隆载体的构建与鉴定第25页
            1.2.4 pGEX-CTLD4-8 表达载体的构建与鉴定第25-26页
            1.2.5 重组蛋白的诱导表达第26-27页
            1.2.6 目的蛋白的Western-blot鉴定(半干法)第27页
            1.2.7 纯化蛋白制备第27-28页
            1.2.8 兔抗CTLD4-8 多克隆抗体的制备第28页
            1.2.9 间接ELISA法测定抗体效价第28页
            1.2.10 Western-blot检测抗体特异性第28-29页
    2 结果与分析第29-33页
        2.1 目的基因CTLD4-8 的PCR扩增第29页
        2.2 pGEM-CTLD4-8 克隆载体构建及鉴定第29-30页
        2.3 pGEX-CTLD4-8 表达载体构建第30-31页
        2.4 原核表达及鉴定第31-32页
        2.5 蛋白纯度检测第32页
        2.6 抗体效价和特异性第32-33页
    3 讨论第33-35页
第三章 MR蛋白在团头鲂胚胎期及幼鱼各组织中的分布第35-46页
    1 材料与方法第35-37页
        1.1 材料第35-36页
            1.1.1 实验动物及菌株第35页
            1.1.2 主要试剂第35页
            1.1.3 主要实验仪器及设备第35-36页
        1.2 方法第36-37页
            1.2.1 主要溶液配制第36页
            1.2.2 不同胚胎发育时期样本的采集第36页
            1.2.3 嗜水气单胞菌感染实验第36-37页
            1.2.4 免疫组化第37页
    2 结果与分析第37-44页
        2.1 MR蛋白在团头鲂胚胎期的表达第37-39页
        2.2 MR蛋白在团头鲂幼鱼各组织中的表达第39-43页
        2.3 嗜水气单胞菌感染后,头肾和脾中MR的分布更加广泛第43-44页
    3 讨论第44-46页
第四章 MR介导团头鲂巨噬细胞吞噬GFP-E.coli,并引发下游免疫应答第46-60页
    1 材料与方法第46-51页
        1.1 材料第46-47页
            1.1.1 实验动物第46页
            1.1.2 主要试剂第46-47页
            1.1.3 主要实验仪器及设备第47页
        1.2 方法第47-51页
            1.2.1 主要溶液配制第47-48页
            1.2.2 团头鲂头肾巨噬细胞的分离与培养第48页
            1.2.3 MR的亚细胞定位第48-49页
            1.2.4 MR在成鱼头肾组织的定位第49页
            1.2.5 巨噬细胞吞噬实验-定性和定量研究第49页
            1.2.6 钙离子依赖性实验第49页
            1.2.7 NBT还原法检测巨噬细胞产生活性氧(ROS)第49-50页
            1.2.8 Griess法检测巨噬细胞产生一氧化氮(NO)第50页
            1.2.9 巨噬细胞总RNA提取及cDNA制备第50页
            1.2.10 Real-time定量PCR第50-51页
            1.2.11 数据分析第51页
    2 结果和分析第51-58页
        2.1 MR在团头鲂巨噬细胞中的亚定位第51-52页
        2.2 MR在团头鲂头肾组织中的分布第52-53页
        2.3 MR介导巨噬细胞吞噬GFP-E.coli第53-55页
        2.4 团头鲂巨噬细胞对GFP-E.coli的吞噬呈钙离子依赖性第55-56页
        2.5 巨噬细胞在GFP-E.coli吞噬中产生ROS和NO第56-57页
        2.6 Real-time PCR检测两种促炎细胞因子mRNA水平的表达第57-58页
    3 讨论第58-60页
结论第60-61页
    1 研究成果总结第60页
    2 创新之处第60页
    3 不足之处第60-61页
参考文献第61-70页
发表文章第70-71页
致谢第71页

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