摘要 | 第7-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
缩略词表 | 第10-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-21页 |
1 MR的结构 | 第13-15页 |
1.1 CR结构域 | 第13-14页 |
1.2 FNⅡ结构域 | 第14页 |
1.3 CTLD结构域 | 第14-15页 |
1.4 胞质尾区 | 第15页 |
2 MR的分布与调控 | 第15-16页 |
3 MR的功能 | 第16-19页 |
3.1 MR维持内环境稳态 | 第16页 |
3.2 MR参与多种微生物的识别 | 第16-17页 |
3.3 MR参与抗原递呈 | 第17-18页 |
3.4 MR和细胞动力学 | 第18页 |
3.5 MR与细胞内信号转导 | 第18-19页 |
4 鱼类MR研究进展及展望 | 第19-21页 |
第二章 甘露糖受体CTLD4-8 结构域的原核表达及抗体制备 | 第21-35页 |
1 材料与方法 | 第21-29页 |
1.1 材料 | 第21-22页 |
1.1.1 实验动物 | 第21页 |
1.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
1.1.3 主要实验仪器及设备 | 第22页 |
1.2 方法 | 第22-29页 |
1.2.1 主要溶液配制 | 第22-24页 |
1.2.2 目的基因扩增 | 第24-25页 |
1.2.3 pGEM-CTLD4-8 克隆载体的构建与鉴定 | 第25页 |
1.2.4 pGEX-CTLD4-8 表达载体的构建与鉴定 | 第25-26页 |
1.2.5 重组蛋白的诱导表达 | 第26-27页 |
1.2.6 目的蛋白的Western-blot鉴定(半干法) | 第27页 |
1.2.7 纯化蛋白制备 | 第27-28页 |
1.2.8 兔抗CTLD4-8 多克隆抗体的制备 | 第28页 |
1.2.9 间接ELISA法测定抗体效价 | 第28页 |
1.2.10 Western-blot检测抗体特异性 | 第28-29页 |
2 结果与分析 | 第29-33页 |
2.1 目的基因CTLD4-8 的PCR扩增 | 第29页 |
2.2 pGEM-CTLD4-8 克隆载体构建及鉴定 | 第29-30页 |
2.3 pGEX-CTLD4-8 表达载体构建 | 第30-31页 |
2.4 原核表达及鉴定 | 第31-32页 |
2.5 蛋白纯度检测 | 第32页 |
2.6 抗体效价和特异性 | 第32-33页 |
3 讨论 | 第33-35页 |
第三章 MR蛋白在团头鲂胚胎期及幼鱼各组织中的分布 | 第35-46页 |
1 材料与方法 | 第35-37页 |
1.1 材料 | 第35-36页 |
1.1.1 实验动物及菌株 | 第35页 |
1.1.2 主要试剂 | 第35页 |
1.1.3 主要实验仪器及设备 | 第35-36页 |
1.2 方法 | 第36-37页 |
1.2.1 主要溶液配制 | 第36页 |
1.2.2 不同胚胎发育时期样本的采集 | 第36页 |
1.2.3 嗜水气单胞菌感染实验 | 第36-37页 |
1.2.4 免疫组化 | 第37页 |
2 结果与分析 | 第37-44页 |
2.1 MR蛋白在团头鲂胚胎期的表达 | 第37-39页 |
2.2 MR蛋白在团头鲂幼鱼各组织中的表达 | 第39-43页 |
2.3 嗜水气单胞菌感染后,头肾和脾中MR的分布更加广泛 | 第43-44页 |
3 讨论 | 第44-46页 |
第四章 MR介导团头鲂巨噬细胞吞噬GFP-E.coli,并引发下游免疫应答 | 第46-60页 |
1 材料与方法 | 第46-51页 |
1.1 材料 | 第46-47页 |
1.1.1 实验动物 | 第46页 |
1.1.2 主要试剂 | 第46-47页 |
1.1.3 主要实验仪器及设备 | 第47页 |
1.2 方法 | 第47-51页 |
1.2.1 主要溶液配制 | 第47-48页 |
1.2.2 团头鲂头肾巨噬细胞的分离与培养 | 第48页 |
1.2.3 MR的亚细胞定位 | 第48-49页 |
1.2.4 MR在成鱼头肾组织的定位 | 第49页 |
1.2.5 巨噬细胞吞噬实验-定性和定量研究 | 第49页 |
1.2.6 钙离子依赖性实验 | 第49页 |
1.2.7 NBT还原法检测巨噬细胞产生活性氧(ROS) | 第49-50页 |
1.2.8 Griess法检测巨噬细胞产生一氧化氮(NO) | 第50页 |
1.2.9 巨噬细胞总RNA提取及cDNA制备 | 第50页 |
1.2.10 Real-time定量PCR | 第50-51页 |
1.2.11 数据分析 | 第51页 |
2 结果和分析 | 第51-58页 |
2.1 MR在团头鲂巨噬细胞中的亚定位 | 第51-52页 |
2.2 MR在团头鲂头肾组织中的分布 | 第52-53页 |
2.3 MR介导巨噬细胞吞噬GFP-E.coli | 第53-55页 |
2.4 团头鲂巨噬细胞对GFP-E.coli的吞噬呈钙离子依赖性 | 第55-56页 |
2.5 巨噬细胞在GFP-E.coli吞噬中产生ROS和NO | 第56-57页 |
2.6 Real-time PCR检测两种促炎细胞因子mRNA水平的表达 | 第57-58页 |
3 讨论 | 第58-60页 |
结论 | 第60-61页 |
1 研究成果总结 | 第60页 |
2 创新之处 | 第60页 |
3 不足之处 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-70页 |
发表文章 | 第70-71页 |
致谢 | 第71页 |