| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第16-30页 |
| 1.1 课题背景 | 第16页 |
| 1.2 研究的目的及意义 | 第16页 |
| 1.3 高糖环境下的心肌重塑 | 第16-19页 |
| 1.3.1 PI3K /Akt通路与糖尿病心肌病 | 第17页 |
| 1.3.2 PTEN在糖尿病心肌中的表达 | 第17-18页 |
| 1.3.3 miRNA及ceRNA机制对PTEN表达的调控研究 | 第18-19页 |
| 1.4 压力过负荷下的心肌重塑 | 第19-25页 |
| 1.4.1 心肌肥大的信号传递系统 | 第20-23页 |
| 1.4.2 CKIP-1 功能研究进展 | 第23-25页 |
| 1.5 miRNA与转录后调控 | 第25-26页 |
| 1.6 蛋白翻译后调控 | 第26-28页 |
| 1.6.1 蛋白磷酸酶 | 第26-27页 |
| 1.6.2 蛋白磷酸酶在心肌重塑中的作用 | 第27-28页 |
| 1.7 本文的主要研究内容和技术路线 | 第28-30页 |
| 1.7.1 主要研究内容 | 第28-29页 |
| 1.7.2 技术路线 | 第29-30页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第30-43页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第30-32页 |
| 2.1.1 材料 | 第30-31页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第31页 |
| 2.1.3 主要设备 | 第31-32页 |
| 2.1.4 实验所用引物 | 第32页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第32-43页 |
| 2.2.1 CKIP-1 心肌特异转基因小鼠的构建 | 第32-34页 |
| 2.2.2 糖尿病模型的构建 | 第34页 |
| 2.2.3 小鼠心肌肥大模型的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.4 超声心动技术检测小鼠心脏功能 | 第35-36页 |
| 2.2.5 原代心肌细胞培养 | 第36-37页 |
| 2.2.6 组织学分析方法 | 第37-38页 |
| 2.2.7 RN A表达分析 | 第38-39页 |
| 2.2.8 蛋白分析 | 第39-40页 |
| 2.2.9 GST pull-down实验和蛋白质谱检测分析 | 第40页 |
| 2.2.10 细胞转染方法 | 第40-41页 |
| 2.2.11 荧光素酶报告基因检测 | 第41页 |
| 2.2.12 DN A断裂检测分析 | 第41页 |
| 2.2.13 细胞色素C的检测分析 | 第41页 |
| 2.2.14 心肌细胞葡萄糖摄取能力分析 | 第41-42页 |
| 2.2.15 统计学方法 | 第42-43页 |
| 第3章 高糖诱导心肌重塑中信号分子的表达特征研究 | 第43-56页 |
| 3.1 引言 | 第43-44页 |
| 3.2 PTEN ceRNAs在糖尿病小鼠心肌中的表达 | 第44-45页 |
| 3.3 不同糖尿病模型心肌中PTEN和DKK 1 的表达 | 第45-47页 |
| 3.3.1 PTEN和DKK1 mRNA在心肌内的表达情况 | 第45-46页 |
| 3.3.2 PTEN和DKK1蛋白在心肌内的表达情况 | 第46-47页 |
| 3.4 DKK 1 对PTEN的调控作用研究 | 第47-50页 |
| 3.4.1 siRNA敲低PTEN和DKK1对二者mRNA表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.2 siRNA敲低PTEN和DKK1对二者蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.3 PTEN敲除的心肌组织内DKK1的表达研究 | 第49-50页 |
| 3.5 miRNA在DKK1对PTEN的调控中的关键性作用研究 | 第50-55页 |
| 3.5.1 DKK1敲低对PTEN 3′非翻译区活性的影响 | 第50-52页 |
| 3.5.2 DKK13′非翻译区过表达对PTEN 3′非翻译区活性的影响 | 第52页 |
| 3.5.3 Dicer敲低情况下DKK1对PTEN的调控研究 | 第52-55页 |
| 3.6 本章小结 | 第55-56页 |
| 第4章 转录后调控机制在高糖诱导心肌重塑中的作用 | 第56-68页 |
| 4.1 引言 | 第56-57页 |
| 4.2 DKK1 和PTEN共有miRNA对二者的调控作用研究 | 第57-61页 |
| 4.2.1 生物信息学分析DKK1和PTEN的共有miRNA | 第57页 |
| 4.2.2 靶向DKK和PTEN的miRNA在糖尿病心肌中的表达研究 | 第57-59页 |
| 4.2.3 miRN A对PTEN和DKK13′端非翻译区荧光素酶活性的影响 | 第59-60页 |
| 4.2.4 miRN A对PTEN和DKK1在心肌细胞中蛋白表达的影响 | 第60-61页 |
| 4.3 DKK 1 对PTEN下游Akt活性的调控作用研究 | 第61-63页 |
| 4.4 DKK 1 对PTEN的调控在高糖诱导心肌重塑中的作用研究 | 第63-67页 |
| 4.4.1 DKK1敲低对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响研究 | 第63-65页 |
| 4.4.2 DKK1敲低对心肌细胞葡萄糖摄取能力的影响研究 | 第65-67页 |
| 4.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第5章 CKIP-1 对压力过负荷诱导心肌重塑的调控作用研究 | 第68-87页 |
| 5.1 引言 | 第68-69页 |
| 5.2 CKIP- 1 在心脏组织中的表达特征研究 | 第69-72页 |
| 5.2.1 CKIP-1 的组织表达谱分析研究 | 第69页 |
| 5.2.2 CKIP-1 在心肌重塑发生过程中心肌组织的表达研究 | 第69-71页 |
| 5.2.3 CKIP-1 在心肌肥大病人心肌中的表达研究 | 第71-72页 |
| 5.3 CKIP- 1 敲除小鼠的心脏表型分析研究 | 第72-76页 |
| 5.3.1 CKIP-1 敲除小鼠的组织形态学变化研究 | 第72-74页 |
| 5.3.2 CKIP-1 敲除小鼠的心肌内胚胎期基因表达分析研究 | 第74-75页 |
| 5.3.3 CKIP-1 敲除小鼠的心脏功能变化 | 第75-76页 |
| 5.4 CKIP- 1 敲除对TAC导致心肌重塑的影响 | 第76-81页 |
| 5.4.1 CKIP-1 敲除对TAC后小鼠心脏组织形态的影响研究 | 第76-78页 |
| 5.4.2 CKIP-1 敲除对TAC后小鼠心肌胚胎期基因表达的影响 | 第78-79页 |
| 5.4.3 CKIP-1 敲除对TAC后小鼠心脏功能的影响 | 第79-81页 |
| 5.5 CKIP- 1 心肌特异过表达对TAC致心肌重塑的保护作用研究 | 第81-86页 |
| 5.5.1 CKIP-1 心肌特异转基因小鼠的筛选与验证 | 第81-82页 |
| 5.5.2 CKIP-1 转基因对TAC后小鼠心脏组织形态学的影响 | 第82-84页 |
| 5.5.3 CKIP-1 转基因对TAC后小鼠胚胎期基因表达的影响 | 第84页 |
| 5.5.4 CKIP-1 转基因对TAC后小鼠心脏功能的影响 | 第84-86页 |
| 5.6 本章小结 | 第86-87页 |
| 第6章 翻译后调控机制在压力过负荷诱导心肌重塑中的作用 | 第87-109页 |
| 6.1 引言 | 第87-88页 |
| 6.2 CKIP-1 相互作用蛋白的鉴定分析研究 | 第88-89页 |
| 6.3 CKIP-1 与HDAC4 的相互作用研究 | 第89-94页 |
| 6.3.1 蛋白免疫共沉淀技术研究CKIP- 1 与HDAC4之间的相互作用 | 第89-91页 |
| 6.3.2 CKIP-1 与HDAC4相互作用区域的鉴定研究 | 第91-92页 |
| 6.3.3 CKIP-1 同II型HDAC s家族成员相互作用的特异性研究 | 第92-94页 |
| 6.4 CK IP-1 对MEF2转录活性的调控作用研究 | 第94-98页 |
| 6.4.1 过表达CKIP-1 对MEF2转录活性的作用研究 | 第94-95页 |
| 6.4.2 HDAC 4 敲低条件下CK IP-1 对MEF2活性的影响研究 | 第95-96页 |
| 6.4.3 CKIP-1 和HDAC4对MEF2活性的协同作用研究 | 第96-97页 |
| 6.4.4 CKIP-1 和HDAC5对MEF2活性的协同作用研究 | 第97-98页 |
| 6.5 CKIP- 1 对HDAC 4 细胞定位的调控作用研究 | 第98-100页 |
| 6.5.1 CKIP-1 与HDAC4细胞共定位研究 | 第98-99页 |
| 6.5.2 CKIP-1 转基因或敲除对HDAC4细胞定位的影响研究 | 第99-100页 |
| 6.6 CKIP- 1通过PP2A对HDAC 4 去磷酸化的调控作用研究 | 第100-108页 |
| 6.6.1 CKIP-1 对HDAC4磷酸化水平的调控研究 | 第100-104页 |
| 6.6.2 CKIP-1 过表达对突变型HDAC4细胞定位的影响研究 | 第104-105页 |
| 6.6.3 CKIP-1 与PP2A的相互作用研究 | 第105-106页 |
| 6.6.4 CKIP-1 对PP2A和HDAC 4 之间相互作用的影响研究 | 第106-108页 |
| 6.7 本章小结 | 第108-109页 |
| 结论 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-126页 |
| 附录 | 第126-129页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 | 第129-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 个人简历 | 第133页 |
