| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 引言 | 第10-17页 |
| 1.1 猪流行性腹泻概述 | 第10-11页 |
| 1.2 抗体 | 第11-13页 |
| 1.3 噬菌体展示技术研究现状和发展趋势 | 第13-15页 |
| 1.4 噬菌体抗体库技术展望 | 第15页 |
| 1.5 研究的目的、意义及内容 | 第15-17页 |
| 2 试验一 PEDV S蛋白表达及纯化 | 第17-31页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-19页 |
| 2.2 试验内容和方法 | 第19-26页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第19-21页 |
| 2.2.2 反转录合成cDNA | 第21页 |
| 2.2.3 PCR扩增S基因片段 | 第21-22页 |
| 2.2.4 克隆质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.5 表达质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.6 S蛋白的表达及纯化 | 第24-26页 |
| 2.3 结果 | 第26-29页 |
| 2.3.1 S基因的扩增结果 | 第26页 |
| 2.3.2 重组质粒的鉴定结果 | 第26-27页 |
| 2.3.3 重组质粒和表达载体质粒的酶切结果 | 第27页 |
| 2.3.4 表达质粒的鉴定结果 | 第27-28页 |
| 2.3.5 表达质粒的测序鉴定结果 | 第28页 |
| 2.3.6 SDS-PAGE鉴定结果 | 第28-29页 |
| 2.3.7 Western-Blot鉴定结果 | 第29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-31页 |
| 3 试验二 抗PEDV单域抗体库构建及PEDV S蛋白特异性sdAb的富集和筛选 | 第31-49页 |
| 3.1 试验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 试验试剂 | 第31页 |
| 3.1.2 主要培养基和缓冲液配制方法 | 第31-32页 |
| 3.1.3 引物 | 第32页 |
| 3.2 试验内容和方法 | 第32-42页 |
| 3.2.1 骆驼的免疫 | 第32页 |
| 3.2.2 血清抗体效价的测定 | 第32-33页 |
| 3.2.3 外周血淋巴细胞分离 | 第33页 |
| 3.2.4 淋巴细胞总RNA提取及反转录合成cDNA | 第33-34页 |
| 3.2.5 单域抗体基因的扩增 | 第34-35页 |
| 3.2.6 VHH片段的酶切和纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.7 pCANTAB5E载体的制备 | 第36-37页 |
| 3.2.8 VHH片段与pCANTAB5E载体连接 | 第37-38页 |
| 3.2.9 电转化感受态大肠杆菌TG1 | 第38页 |
| 3.2.10 抗体库的初步鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.11 PEDV S蛋白特异性单域抗体的富集和筛选 | 第39-42页 |
| 3.3 结果 | 第42-47页 |
| 3.3.1 血清抗体效价ELISA测定结果 | 第42-43页 |
| 3.3.2 VHH基因的扩增结果 | 第43-44页 |
| 3.3.3 pCANTAB5E质粒酶切结果 | 第44页 |
| 3.3.4 抗体库的鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.3.5 辅助噬菌体M13K07复壮滴度结果 | 第45-46页 |
| 3.3.6 PEDV S蛋白特异性噬菌体抗体库的富集和筛选结果 | 第46页 |
| 3.3.7 重组噬菌体单链抗体ELISA鉴定结果 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
