| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| 1.1 立题意义 | 第7页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第7-12页 |
| 1.2.1 脯氨酰内肽酶简介 | 第7页 |
| 1.2.2 脯氨酰内肽酶的应用 | 第7-9页 |
| 1.2.3 脯氨酰内肽酶的表达 | 第9页 |
| 1.2.4 米曲霉脯氨酰内肽酶的表达 | 第9页 |
| 1.2.5 毕赤酵母表达系统概述 | 第9-10页 |
| 1.2.6 提高外源蛋白表达量的策略 | 第10页 |
| 1.2.7 融合表达 | 第10-12页 |
| 1.3 本课题研究思路和内容 | 第12-13页 |
| 1.3.1 课题研究思路 | 第12页 |
| 1.3.2 课题研究内容 | 第12页 |
| 1.3.3 课题来源 | 第12-13页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第13-22页 |
| 2.1 实验材料 | 第13-15页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第13页 |
| 2.1.2 培养基与溶液 | 第13-14页 |
| 2.1.3 主要试剂及仪器 | 第14-15页 |
| 2.2 实验方法 | 第15-22页 |
| 2.2.1 重组PEP基因表达菌株的构建 | 第15-16页 |
| 2.2.2 重组PEP表达菌株的构建 | 第16-17页 |
| 2.2.3 重组阳性克隆菌株的筛选 | 第17页 |
| 2.2.4 基因重组菌株的生长及表达 | 第17页 |
| 2.2.5 脯氨酰内肽酶酶活力测定方法 | 第17-18页 |
| 2.2.6 重组菌株脯氨酰内肽酶基因拷贝数的鉴定 | 第18页 |
| 2.2.7 反转录法鉴定mRNA | 第18-19页 |
| 2.2.8 重组蛋白的鉴定 | 第19页 |
| 2.2.9 重组蛋白的分离纯化及酶学性质测定 | 第19-20页 |
| 2.2.10 重组菌株在 7 L发酵罐高密度发酵 | 第20-21页 |
| 2.2.11 脯氨酰内肽酶对啤酒非生物稳定性的研究 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-37页 |
| 3.1 米曲霉脯氨酰内肽酶在毕赤酵母中的表达 | 第22-25页 |
| 3.2 米曲霉脯氨酰内肽酶在毕赤酵母中的融合表达 | 第25-28页 |
| 3.2.1 荧光定量PCR鉴定出发菌株及融合表达菌株的目的基因拷贝数 | 第26页 |
| 3.2.2 融合表达菌株的摇瓶发酵 | 第26-28页 |
| 3.2.3 融合蛋白western blot分析 | 第28页 |
| 3.3 不同连接肽对以磷脂酶为融合标签的重组脯氨酸蛋白酶的影响 | 第28-29页 |
| 3.4 融合蛋白转录水平分析 | 第29-30页 |
| 3.5 米曲霉脯氨酰内肽酶酶学性质研究 | 第30-33页 |
| 3.5.1 融合蛋白PLMH的MADLI-TOF-MS分析 | 第30-31页 |
| 3.5.2 脯氨酰内肽酶酶学性质研究 | 第31-33页 |
| 3.6 融合表达菌株毕赤酵母基因工程菌的 7 L发酵罐高密度培养 | 第33-35页 |
| 3.7 脯氨酰内肽酶对啤酒非生物稳定性的应用研究 | 第35-37页 |
| 3.7.1 不同加酶量对成品啤酒贮存期间的稳定性研究 | 第35页 |
| 3.7.2 不同加酶量对啤酒发酵液中浑浊蛋白的影响 | 第35-37页 |
| 主要结论与展望 | 第37-39页 |
| 主要结论 | 第37-38页 |
| 展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录：附表 | 第44-45页 |
| 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第45页 |
