| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 鸭坦布苏病毒的概述 | 第15-27页 |
| 1 病原学分类 | 第15页 |
| 2 形态结构及理化培养特性 | 第15-16页 |
| 3 基因结构及蛋白特性 | 第16-18页 |
| 4 流行病学特征 | 第18-19页 |
| 5 病毒对动物的致病性 | 第19页 |
| 6 病毒感染的诊断方法 | 第19-21页 |
| 6.1 临床诊断 | 第19页 |
| 6.2 实验室诊断 | 第19-21页 |
| 7 预防和控制 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-27页 |
| 第二章 鸭坦布苏病毒XZ-2012株的分离鉴定与基因变异分析 | 第27-41页 |
| 1 试验材料 | 第28-29页 |
| 2 试验方法 | 第29-32页 |
| 2.1 病料的采集及处理 | 第29页 |
| 2.2 接种SPF鸡胚分离毒株 | 第29页 |
| 2.3 RT-PCR鉴定鸭坦布苏病毒 | 第29页 |
| 2.4 血凝试验 | 第29页 |
| 2.5 分离毒株的细胞培养 | 第29页 |
| 2.6 空斑形成试验 | 第29-30页 |
| 2.7 引物设计 | 第30-31页 |
| 2.8 基因组RT-PCR扩增 | 第31页 |
| 2.9 基因克隆及测序 | 第31页 |
| 2.10 序列分析 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-37页 |
| 3.1 疑似鸭坦布苏病毒病病鸭的病变特征 | 第32页 |
| 3.2 DTMUV XZ-2012株的分离与RT-PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3 DTMUV XZ-2012株接种BHK-21细胞的病变特征 | 第33-34页 |
| 3.4 DTMUV XZ-2012空斑形成试验结果 | 第34页 |
| 3.5 DTMUV XZ-2012株全基因RT-PCR扩增结果 | 第34页 |
| 3.6 DTMUV XZ-2012株基因序列分析 | 第34-35页 |
| 3.7 DTMUV XZ-2012株基因进化树和同源性分析 | 第35-37页 |
| 3.8 DTMUV XZ-2012株各基因与BYD株和Shandong1株的比较分析 | 第37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-41页 |
| 第三章 鸭坦布苏病毒EDⅢ蛋白单克隆抗体的制备与特性鉴定 | 第41-57页 |
| 1 试验材料 | 第43页 |
| 2 试验方法 | 第43-47页 |
| 2.1 DTMUV EDⅢ蛋白的表达及纯化 | 第43页 |
| 2.2 小鼠免疫 | 第43页 |
| 2.3 SP2/O骨髓瘤细胞的复苏及准备 | 第43-44页 |
| 2.4 饲养细胞的制备 | 第44页 |
| 2.5 免疫小鼠脾细胞的制备 | 第44页 |
| 2.6 细胞融合 | 第44-45页 |
| 2.7 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第45页 |
| 2.8 杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法)培养以及冻存 | 第45-46页 |
| 2.9 单克隆抗体的制备 | 第46页 |
| 2.10 单克隆抗体的Western blot鉴定 | 第46页 |
| 2.11 单克隆抗体的间接免疫荧光(IFA)分析 | 第46页 |
| 2.12 抗体分泌稳定性的鉴定 | 第46页 |
| 2.13 腹水抗体效价测定 | 第46页 |
| 2.14 单克隆抗体亚类和型的鉴定 | 第46页 |
| 2.15 单克隆抗体与日本脑炎病毒的反应检测 | 第46-47页 |
| 2.16 单克隆抗体中和活性的测定 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-54页 |
| 3.1 抗原的制备纯化结果 | 第47-48页 |
| 3.2 杂交瘤细胞株的建立 | 第48页 |
| 3.3 Western blot分析结果 | 第48页 |
| 3.4 间接免疫荧光(IFA)分析结果 | 第48-49页 |
| 3.5 抗体分泌稳定性的鉴定结果 | 第49页 |
| 3.6 腹水抗体效价测定结果 | 第49-50页 |
| 3.7 单克隆抗体亚类和型的鉴定结果 | 第50页 |
| 3.8 单克隆抗体与日本脑炎病毒的交叉反应结果 | 第50-51页 |
| 3.9 单克隆抗体中和活性的测定结果 | 第51-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 第四章 鸭坦布苏病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备 | 第57-71页 |
| 1 试验材料 | 第58-59页 |
| 2 试验方法 | 第59-62页 |
| 2.1 DTMUV NS1蛋白的表达及纯化 | 第59页 |
| 2.2 动物免疫 | 第59页 |
| 2.3 SP2/O骨髓瘤细胞的复苏及准备 | 第59页 |
| 2.4 饲养细胞的制备 | 第59页 |
| 2.5 免疫小鼠脾细胞的制备 | 第59-60页 |
| 2.6 细胞融合 | 第60页 |
| 2.7 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第60-61页 |
| 2.8 杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法)培养以及冻存 | 第61页 |
| 2.9 单克隆抗体的制备 | 第61页 |
| 2.10 单克隆抗体的Western blot鉴定 | 第61-62页 |
| 2.11 单克隆抗体的间接免疫荧光(IFA)分析 | 第62页 |
| 2.12 抗体分泌稳定性的鉴定 | 第62页 |
| 2.13 腹水抗体效价测定 | 第62页 |
| 2.14 单克隆抗体亚类和型的鉴定 | 第62页 |
| 2.15 单克隆抗体与日本脑炎病毒的反应检测 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-67页 |
| 3.1 抗原的制备纯化结果 | 第62-63页 |
| 3.2 杂交瘤细胞株的建立 | 第63页 |
| 3.3 Western blot分析 | 第63-64页 |
| 3.4 间接免疫荧光(IFA)分析结果 | 第64-65页 |
| 3.5 抗体分泌稳定性的鉴定结果 | 第65页 |
| 3.6 腹水抗体效价测定结果 | 第65-66页 |
| 3.7 单克隆抗体亚类和型的鉴定结果 | 第66页 |
| 3.8 单克隆抗体与日本脑炎病毒的交叉反应结果 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 第五章 鸭坦布苏病毒EDⅢ蛋白B细胞表位的鉴定 | 第71-85页 |
| 1 试验材料 | 第72-73页 |
| 2 试验方法 | 第73-76页 |
| 2.1 引物的设计 | 第73页 |
| 2.2 目的基因的扩增 | 第73页 |
| 2.3 目的基因与pGEX-6p-I载体的酶切处理 | 第73-74页 |
| 2.4 重组质粒的构建 | 第74页 |
| 2.5 感受态的制备及转化 | 第74页 |
| 2.6 重组质粒的鉴定 | 第74页 |
| 2.7 目的蛋白的表达与鉴定 | 第74-75页 |
| 2.8 目的蛋白的SDS-PAGE电泳分析 | 第75页 |
| 2.9 EDⅢ蛋白B细胞表位鉴定 | 第75页 |
| 2.10 鸭坦布苏病毒EDⅢ蛋白抗原表位的变异分析 | 第75-76页 |
| 2.11 鸭坦布苏病毒EDⅢ蛋白抗原表位交叉性分析 | 第76页 |
| 3 结果 | 第76-83页 |
| 3.1 鸭坦布苏病毒EDⅢ截短蛋白的表达 | 第76-78页 |
| 3.2 Western blot鉴定单克隆抗体与截短蛋白反应性 | 第78-79页 |
| 3.3 合成肽的ELISA鉴定 | 第79页 |
| 3.4 融合肽的表达及western blot鉴定 | 第79-81页 |
| 3.5 EDⅢ蛋白抗原表位的变异分析 | 第81-83页 |
| 4 讨论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-85页 |
| 全文总结 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
