| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词 (Abbreviations) | 第15-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 蛋白激酶 | 第16-19页 |
| 1.1.1 蛋白激酶概述 | 第16页 |
| 1.1.2 蛋白激酶的分类 | 第16-17页 |
| 1.1.3 蛋白激酶的结构与功能 | 第17-18页 |
| 1.1.4 蛋白激酶的活性调节 | 第18-19页 |
| 1.2 植物蛋白激酶研究进展 | 第19-26页 |
| 1.2.1 植物蛋白激酶与信号转导 | 第19页 |
| 1.2.2 CIPK蛋白激酶 | 第19-21页 |
| 1.2.3 酪蛋白激酶 | 第21-26页 |
| 1.3 本论文研究目的、意义与内容 | 第26-28页 |
| 1.3.1 研究目的与意义 | 第26-27页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第27-28页 |
| 第2章 蛋白激酶CIPK生物信息学及基因表达分析 | 第28-48页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-31页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.1.2 SbCIPKs基因组数据的搜索和鉴定 | 第28页 |
| 2.1.3 同源结构域的比对和进化树的构建 | 第28-29页 |
| 2.1.4 染色体片段倍增和串联倍增的确定 | 第29页 |
| 2.1.5 SbCIPKs修饰位点分析 | 第29页 |
| 2.1.6 启动子分析方法 | 第29页 |
| 2.1.7 总RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.1.8 实时荧光定量PCR | 第30-31页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第31-46页 |
| 2.2.1 高粱CIPKs的基因组生物信息学分析 | 第31-38页 |
| 2.2.2 高粱CIPKs蛋白的比较分析 | 第38-43页 |
| 2.2.3 SbCIPKs的Na_2CO_3诱导表达和组织特异性表达模式 | 第43-46页 |
| 2.3 小结 | 第46-48页 |
| 第3章 蛋白激酶SbCIPK4的生物学功能分析 | 第48-59页 |
| 3.1 材料与方法 | 第48-51页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 3.1.2 总RNA提取 | 第48页 |
| 3.1.3 表达载体构建 | 第48-49页 |
| 3.1.4 拟南芥转化及转基因植物筛选 | 第49页 |
| 3.1.5 半定量RT-PCR | 第49-50页 |
| 3.1.6 实时荧光定量PCR | 第50-51页 |
| 3.1.7 烟草瞬时表达 | 第51页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第51-57页 |
| 3.2.0 AtCIPK14和SbCIPKs的同源性分析 | 第51-53页 |
| 3.2.1 SbCIPK4转基因拟南芥获得 | 第53-54页 |
| 3.2.2 SbCIPK4基因的亚细胞定位分析 | 第54-55页 |
| 3.2.3 SbCIPK4过量表达转基因株系幼苗对盐胁迫的响应 | 第55-56页 |
| 3.2.4 盐胁迫下SbCIPK4过量表达转基因株系中胁迫相关基因表达分析 | 第56-57页 |
| 3.3 小结 | 第57-59页 |
| 第4章 蛋白激酶SbCIPK4的生化机制分析 | 第59-70页 |
| 4.1 材料与方法 | 第59-63页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第59页 |
| 4.1.2 酵母互作实验载体的构建 | 第59-60页 |
| 4.1.3 酵母双杂交验证实验 | 第60页 |
| 4.1.4 酵母双杂交阳性克隆的筛选 | 第60-61页 |
| 4.1.5 重组蛋白的表达与纯化 | 第61页 |
| 4.1.6 小鼠免疫 | 第61页 |
| 4.1.7 抗体效价和特异性分析 | 第61-62页 |
| 4.1.8 Pull-Down分析方法 | 第62页 |
| 4.1.9 定量PCR检测 | 第62-63页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第63-69页 |
| 4.2.1 酵母互作载体pGADT7-CBLS和pGBKT7-SbCIPK4构建 | 第63-64页 |
| 4.2.2 SbCIPK4与SbCBLs酵母互作分析 | 第64-65页 |
| 4.2.3 SbCIPK4与SbCBL5的Pull-Down分析 | 第65-66页 |
| 4.2.4 抗体滴度和特异性分析 | 第66-67页 |
| 4.2.5 碱胁迫处理后SbCBLs基因的表达水平检测 | 第67-69页 |
| 4.3 小结 | 第69-70页 |
| 第5章 CK1A的生物学功能及生化分析 | 第70-89页 |
| 5.1 材料与方法 | 第70-73页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第70页 |
| 5.1.2 生物信息学分析 | 第70页 |
| 5.1.3 植物材料的处理和收集 | 第70-71页 |
| 5.1.4 总RNA提取 | 第71页 |
| 5.1.5 RT-PCR | 第71页 |
| 5.1.6 实时荧光定量PCR | 第71-72页 |
| 5.1.7 AtCK1A表达载体的构建 | 第72页 |
| 5.1.8 拟南芥开花时间的测定 | 第72页 |
| 5.1.9 原生质体的转化 | 第72-73页 |
| 5.1.10 重组蛋白的原核表达和纯化 | 第73页 |
| 5.1.11 重组蛋白的Western blot鉴定 | 第73页 |
| 5.1.12 重组蛋白的自磷酸化检测 | 第73页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第73-88页 |
| 5.2.1 CK1A与CK1家族成员的同源性分析 | 第73-75页 |
| 5.2.2 CK1A启动子的顺式元件分析 | 第75-76页 |
| 5.2.3 CK1A基因的表达分析 | 第76-79页 |
| 5.2.4 CK1A的生物学功能分析 | 第79-82页 |
| 5.2.5 CK1A的亚细胞定位分析 | 第82-83页 |
| 5.2.6 CK1A蛋白激酶原核表达、纯化及活性分析 | 第83-88页 |
| 5.3 小结 | 第88-89页 |
| 结论与展望 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 附录 A 攻读博士学位期间所发表的学术论文目录 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
