| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 常用缩略词表 | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 病原学 | 第13-18页 |
| 1.1 腺病毒的分类 | 第13-14页 |
| 1.2 PADV-3基因组结构及特点 | 第14-15页 |
| 1.3 PADV-3 Hexon和E区基因的结构功能 | 第15-16页 |
| 1.4 PADV-3生物学特性 | 第16页 |
| 1.5 PADV-3病原流行 | 第16-17页 |
| 1.6 疫苗载体应用 | 第17-18页 |
| 2 检测方法研究应用 | 第18-20页 |
| 2.1 免疫电子显微镜 | 第18-19页 |
| 2.2 酶联免疫吸附试验 | 第19页 |
| 2.3 聚合酶链式反应 | 第19-20页 |
| 3 前景展望 | 第20页 |
| 4 研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第一章 猪腺病毒3型PCR检测方法的建立 | 第21-42页 |
| 1 试验材料 | 第21-23页 |
| 1.1 阳性病料 | 第21页 |
| 1.2 临床样品的收集 | 第21-22页 |
| 1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 1.4 主要仪器 | 第22页 |
| 1.5 溶液配制 | 第22-23页 |
| 2 试验方法 | 第23-30页 |
| 2.1 PADV-3 PCR检测方法的建立 | 第23-28页 |
| 2.1.1 引物合成与设计 | 第23页 |
| 2.1.2 病毒DNA提取 | 第23-24页 |
| 2.1.3 目的片段PCR扩增 | 第24页 |
| 2.1.4 PCR产物的回收及纯化 | 第24-25页 |
| 2.1.5 感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2.1.6 连接转化 | 第26页 |
| 2.1.7 质粒的提取与鉴定 | 第26-27页 |
| 2.1.8 反应条件的优化 | 第27页 |
| 2.1.9 特异性试验 | 第27页 |
| 2.1.10 敏感性试验 | 第27页 |
| 2.1.11 重复性试验 | 第27页 |
| 2.1.12 PADV-3感染情况调查 | 第27-28页 |
| 2.2 PADV-3实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第28-30页 |
| 2.2.1 荧光定量PCR引物的设计 | 第28页 |
| 2.2.2 病毒核酸的提取 | 第28页 |
| 2.2.3 阳性标准品的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.4 反应条件的优化 | 第29页 |
| 2.2.5 标准曲线的建立 | 第29页 |
| 2.2.6 特异性试验 | 第29页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR和常规PCR敏感度 | 第29页 |
| 2.2.8 重复性及再现性评估 | 第29-30页 |
| 2.2.9 PADV-3感染组织特性研究 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-39页 |
| 3.1 PADV-3 PCR检测方法建立结果 | 第30-34页 |
| 3.1.1 退火温度和引物浓度优化结果 | 第30-31页 |
| 3.1.2 目的片段克隆与序列分析 | 第31页 |
| 3.1.3 PCR的特异性试验结果 | 第31-32页 |
| 3.1.4 PCR敏感性试验结果 | 第32页 |
| 3.1.5 PCR重复性试验结果 | 第32-33页 |
| 3.1.6 PADV-3感染情况调查 | 第33-34页 |
| 3.2 PADV-3实时荧光定量PCR建立结果 | 第34-39页 |
| 3.2.1 优化实时荧光定量PCR检测条件 | 第34页 |
| 3.2.2 实时荧光定量PCR标准曲线的绘制 | 第34-35页 |
| 3.2.3 熔解曲线和特异性分析 | 第35-36页 |
| 3.2.4 PADV-3实时荧光定量PCR敏感性 | 第36-37页 |
| 3.2.5 重复性及再现性评估 | 第37-38页 |
| 3.2.6 PADV-3感染组织特性研究 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 4.1 PCR的检测方法 | 第39-40页 |
| 4.2 实时荧光定量PCR的检测方法 | 第40-41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 第二章 HEXON基因克隆分析 | 第42-52页 |
| 1 试验材料 | 第42页 |
| 1.1 生物信息学软件 | 第42页 |
| 2 试验方法 | 第42-44页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第42页 |
| 2.2 PADV-3 Hexon全基因克隆与测序 | 第42-43页 |
| 2.3 Hexon蛋白基本理化性质分析 | 第43页 |
| 2.4 Hexon基因密码子的偏嗜性分析 | 第43页 |
| 2.5 抗原表位预测分析 | 第43页 |
| 2.6 Hexon蛋白疏水性分析 | 第43页 |
| 2.7 Hexon蛋白信号肽分析 | 第43页 |
| 2.8 Hexon蛋白磷酸化位点分析 | 第43页 |
| 2.9 遗传变异分析 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-49页 |
| 3.1 Hexon基因克隆与鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2 Hexon蛋白基本理化性质分析 | 第45页 |
| 3.3 Hexon基因密码子的偏嗜性分析 | 第45页 |
| 3.4 抗原表位预测分析 | 第45-46页 |
| 3.5 Hexon蛋白疏水性分析 | 第46-47页 |
| 3.6 Hexon蛋白信号肽分析 | 第47-48页 |
| 3.7 Hexon蛋白磷酸化位点分析 | 第48页 |
| 3.8 遗传变异分析 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 5 小结 | 第51-52页 |
| 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58页 |