| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-24页 |
| ·概述 | 第12页 |
| ·内切型-β-葡聚糖酶基因的研究进展 | 第12-17页 |
| ·国内相关成果 | 第12-14页 |
| ·国外研究现状 | 第14-17页 |
| ·β-葡聚糖酶的应用及展望 | 第17-18页 |
| ·在啤酒工业中的应用 | 第17页 |
| ·在饲料工业中的应用 | 第17-18页 |
| ·在纺织工业中的应用 | 第18页 |
| ·基因表达系统的相关研究 | 第18-23页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第19-21页 |
| ·丝状真菌表达系统 | 第21-23页 |
| ·本研究思路及意义 | 第23-24页 |
| 2 厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1在大肠杆菌中的表达 | 第24-36页 |
| ·材料与方法 | 第24-26页 |
| ·质粒与菌株 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·菌株培养 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的构建与验证 | 第25页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达产物分析 | 第25页 |
| ·表达产物的最适作用条件研究 | 第25页 |
| ·重组大肠杆菌表达条件的优化及摇瓶产酶试验 | 第25页 |
| ·菌体浓度测定 | 第25页 |
| ·内切型-β-葡聚糖酶(CMC酶)活力的测定 | 第25-26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-34页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第26页 |
| ·重组质粒鉴定分析 | 第26-27页 |
| ·af1基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第27-28页 |
| ·af1基因表达产物AF1-1蛋白的最适作用条件 | 第28-30页 |
| ·重组大肠杆菌表达条件的优化 | 第30-33页 |
| ·重组大肠杆菌的摇瓶产酶试验 | 第33-34页 |
| ·小结 | 第34-36页 |
| 3 厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1在毕赤酵母中的表达 | 第36-46页 |
| ·材料与方法 | 第36-39页 |
| ·质粒与菌株 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·培养基与菌株培养条件 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的构建及验证 | 第37页 |
| ·毕赤酵母的电转化 | 第37-38页 |
| ·重组毕赤酵母的筛选 | 第38页 |
| ·重组毕赤酵母的基因组提取 | 第38页 |
| ·基因组PCR | 第38页 |
| ·重组毕赤酵母的诱导培养 | 第38页 |
| ·af1基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第38-39页 |
| ·菌体浓度及细胞数量测定 | 第39页 |
| ·CMC酶活力的测定方法 | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-44页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建及验证 | 第39-40页 |
| ·重组毕赤酵母的筛选、鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组毕赤酵母表达产物的分析 | 第41-43页 |
| ·重组毕赤酵母的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-46页 |
| 4 重组里氏木霉产内切型-β-葡聚糖酶的研究 | 第46-58页 |
| ·材料与方法 | 第46-48页 |
| ·菌株与试剂 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46-47页 |
| ·重组转化子的试管筛选 | 第47页 |
| ·重组转化子的摇瓶筛选 | 第47页 |
| ·菌株的摇瓶发酵培养 | 第47页 |
| ·分析检测方法 | 第47-48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-56页 |
| ·重组里氏木霉的初筛 | 第48-49页 |
| ·重组里氏木霉的复筛 | 第49-50页 |
| ·重组里氏木霉T/af1-3的产酶进程研究 | 第50-52页 |
| ·重组里氏木霉T/egⅡ-5的产酶进程研究 | 第52-54页 |
| ·重组里氏木霉T/af1-3与重组毕赤酵母GS115/pPIC9K-af1产酶性能的比较 | 第54-55页 |
| ·重组里氏木霉T/af1-3与T/egⅡ-5产酶性能的对比分析 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-58页 |
| 5 结论与建议 | 第58-61页 |
| ·结论 | 第58-59页 |
| ·建议 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录:论文发表情况 | 第69页 |
