| 致谢 | 第1-6页 |
| 前言 | 第6-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-13页 |
| 1 绪论 | 第13-19页 |
| ·端粒及其功能 | 第13页 |
| ·端粒酶及其功能 | 第13-15页 |
| ·DDRGK1国内外研究进展 | 第15-16页 |
| ·类泛素化修饰Ufmylation | 第16-18页 |
| ·DDRGK1、hTERT和内质网应激 | 第18-19页 |
| 2 实验材料和方法 | 第19-41页 |
| ·实验材料 | 第19-31页 |
| ·细胞系和菌株 | 第19页 |
| ·质粒 | 第19-20页 |
| ·引物、siRNA和shRNA | 第20-23页 |
| ·工具酶等 | 第23-24页 |
| ·试剂盒 | 第24页 |
| ·抗体 | 第24-25页 |
| ·常用试剂和缓冲液 | 第25-29页 |
| ·其他主要试剂和耗材 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·细菌的转化 | 第31-32页 |
| ·菌种冻存 | 第32页 |
| ·质粒的扩增 | 第32页 |
| ·质粒的提取 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA/RNA浓度及纯度测定 | 第33页 |
| ·细胞复苏、传代和冻存 | 第33-34页 |
| ·细胞总RNA的抽提 | 第34页 |
| ·cDNA的制备 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR | 第35页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第35-36页 |
| ·质粒的构建 | 第36页 |
| ·转染 | 第36-37页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第37页 |
| ·免疫印迹 | 第37-39页 |
| ·免疫共沉淀(CO-IP) | 第39-40页 |
| ·端粒酶活性检测 | 第40-41页 |
| 3 实验结果和讨论 | 第41-54页 |
| ·DDRGK1和hTERT相互作用及结合区域互作分析 | 第41-45页 |
| ·DDRGK1和hTERT存在相互作用 | 第41-42页 |
| ·DDRGK1和hTERT结合区域互作分析 | 第42-45页 |
| ·DDRGK1不同缺失片段表达载体的构建 | 第42-45页 |
| ·DDRGK1对hTERT生物学功能的调控 | 第45-49页 |
| ·DDRGK1调控端粒酶活性 | 第45-47页 |
| ·DDRGK1不影响hTERT的mRNA表达 | 第47-48页 |
| ·DDRGK1影响hTERT蛋白稳定性 | 第48-49页 |
| ·Ufmylation修饰系统的构建 | 第49-52页 |
| ·Ufmylation修饰系统表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·Ufmylation修饰系统载体的表达检测 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |