| 摘要 | 第1-5页 |
| abstract | 第5-10页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 名词解释 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-32页 |
| 1 研究目的和意义 | 第12-13页 |
| 2 β-内酰胺类抗生素概述 | 第13-17页 |
| ·β-内酰胺类抗生素及其分类 | 第13-15页 |
| ·作用机理及兽医临床应用 | 第15-17页 |
| 3 β-内酰胺类抗生素残留检测技术进展 | 第17-20页 |
| ·微生物检测法 | 第18-19页 |
| ·理化检测法 | 第19页 |
| ·免疫分析法 | 第19-20页 |
| 4 遗传编码非天然氨基酸技术概述 | 第20-29页 |
| ·技术的简介及其原理 | 第20-24页 |
| ·技术的应用 | 第24-29页 |
| 5 荧光氨基酸7HC简介 | 第29-31页 |
| 6 研究的内容和方法 | 第31-32页 |
| 第二章 带荧光氨基酸的青霉素结合蛋白(PBP2x_7HC)的表达纯化 | 第32-58页 |
| 1 实验材料 | 第32-35页 |
| ·试剂 | 第32-33页 |
| ·溶液系统 | 第33-34页 |
| ·菌株 | 第34页 |
| ·仪器设备 | 第34-35页 |
| 2 方法 | 第35-44页 |
| ·青霉素结合蛋白PBP2x表达载体的构建 | 第35-38页 |
| ·PBP2x_W374TAG,PBP2x_Y561TAG表达载体构建 | 第38-40页 |
| ·正交tRNA及氨酰tRNA合成酶表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·PBP2x_7HC表达测试 | 第41-42页 |
| ·PBP2x_7HC表达优化 | 第42-43页 |
| ·PBP2x_7HC大量生产和鉴定 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-54页 |
| ·PBP2x目的基因的扩增 | 第45页 |
| ·PBP2x表达载体的构建与鉴定 | 第45-46页 |
| ·PBP2x_W374TAG,PBP2x_Y561TAG表达载体构建与鉴定 | 第46页 |
| ·7HC氨酰tRNA合成酶基因的扩增 | 第46-47页 |
| ·正交tRNA及氨酰tRNA合成酶表达质粒的构建与鉴定 | 第47-48页 |
| ·PBP2x_7HC表达测试 | 第48-49页 |
| ·PBP2x_7HC表达优化 | 第49-52页 |
| ·PBP2x_7HC大量表达和纯化 | 第52-53页 |
| ·PBP2x_7HC的理化分析 | 第53-54页 |
| ·PBP2x_7HC的质谱分析 | 第54页 |
| 4 分析与讨论 | 第54-56页 |
| ·非天然氨基酸插入位点的选择 | 第54-55页 |
| ·PBP2x_7HC的表达和优化 | 第55-56页 |
| ·PBP2x_7HC大量生产的展望 | 第56页 |
| 5 小结 | 第56-58页 |
| 第三章 基于PBP2x_7HC的β-内酰胺类抗生素荧光检测法的建立 | 第58-77页 |
| 1 实验材料 | 第58-60页 |
| ·标准品 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58-59页 |
| ·奶样 | 第59页 |
| ·溶液系统 | 第59-60页 |
| ·仪器设备 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-63页 |
| ·PBP2x_7HC荧光光谱的测定 | 第60页 |
| ·PBP2x_7HC与氨苄西林结合前后荧光光谱的测定 | 第60-61页 |
| ·PBP2x_7HC激发波长的确定 | 第61页 |
| ·基于PBP2x_7HC的荧光检测法的建立 | 第61-62页 |
| ·牛奶样本的前处理 | 第62-63页 |
| ·牛奶样品添加与回收 | 第63页 |
| ·基于PBP2X-7HC的多残留检测方法的建立 | 第63页 |
| ·实际牛奶样本的检测 | 第63页 |
| 3 结果 | 第63-73页 |
| ·PBP2x_7HC的激发光谱及发射光谱 | 第63-64页 |
| ·PBP2x_7HC与氨苄西林结合前后激发光谱的变化和选择 | 第64页 |
| ·检测方法激发波长的确定 | 第64-67页 |
| ·基于PBP2x_7HC的β_内酰胺类抗生素荧光检测法 | 第67-71页 |
| ·牛奶样本前处理 | 第71页 |
| ·牛奶样本的添加回收率 | 第71-73页 |
| ·多残留样本的检测 | 第73页 |
| ·实际牛奶样本的检测 | 第73页 |
| 4 分析与讨论 | 第73-76页 |
| ·基于PBP2X_7HC的检测方法的建立 | 第74-75页 |
| ·牛奶中多种β_内酰胺类抗生素残留的检测 | 第75页 |
| ·遗传编码荧光非天然氨基酸用于荧光检测 | 第75-76页 |
| 5 小结 | 第76-77页 |
| 第四章 提高PBP2x_7HC产率的研究 | 第77-94页 |
| 1 实验材料 | 第77-80页 |
| ·试剂 | 第77-78页 |
| ·溶液系统 | 第78-79页 |
| ·菌株 | 第79页 |
| ·仪器设备 | 第79-80页 |
| 2 方法 | 第80-83页 |
| ·质粒的构建 | 第80-81页 |
| ·表达宿主生长速度的测试 | 第81页 |
| ·琥珀抑制子压力下外源目的基因的表达测试 | 第81-82页 |
| ·UaaTech相关基因的完整性测试 | 第82页 |
| ·突变基因的分析 | 第82页 |
| ·宿主差异蛋白质组学质谱定量分析(iTRAQ) | 第82-83页 |
| ·宿主内源性蛋白YdiI的调控及其对外源目的基因表达的影响分析 | 第83页 |
| ·宿主内源性蛋白YdiI的功能分析 | 第83页 |
| 3 结果 | 第83-91页 |
| ·质粒的构建 | 第83-86页 |
| ·宿主生长速度的变化及外源目的基因表达的改变 | 第86-87页 |
| ·UaaTech相关基因的突变及分析 | 第87-88页 |
| ·宿主内源性蛋白表达水平的变化及分析 | 第88-89页 |
| ·宿主内源性蛋白YdiI的调控及其对外源目的基因表达的影响 | 第89-90页 |
| ·宿主内源性蛋白YdiI的功能分析 | 第90-91页 |
| 4 分析与讨论 | 第91-93页 |
| ·表达宿主的表型变化 | 第92页 |
| ·表达宿主外源基因的变化 | 第92页 |
| ·表达宿主内源基因的变化 | 第92-93页 |
| ·YdiI基因调控尝试及功能确定 | 第93页 |
| 5 小结 | 第93-94页 |
| 第五章 结论 | 第94-95页 |
| 创新点 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 个人简历 | 第106页 |
