| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 肿瘤免疫治疗概述 | 第12-13页 |
| 2 Nanog蛋白在肿瘤免疫治疗中的研究进展 | 第13-16页 |
| ·干性蛋白Nanog在干细胞和肿瘤细胞中作用 | 第13-14页 |
| ·Nanog在胚胎干细胞中的作用 | 第14页 |
| ·Nanog在肿瘤细胞中维持干性 | 第14-15页 |
| ·Nanog参与免疫逃逸 | 第15-16页 |
| 3 Toll样受体激动剂在肿瘤免疫治疗中的研究进展 | 第16-19页 |
| ·概述 | 第16-18页 |
| ·TLR激动剂的临床应用 | 第18页 |
| ·TLR7激动剂作为疫苗佐剂的研究进展 | 第18-19页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-37页 |
| 1 实验材料 | 第20-22页 |
| ·质粒、菌株与细胞 | 第20页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| 2 常用试剂的配制 | 第22-25页 |
| ·蛋白表达试剂 | 第22-23页 |
| ·蛋白纯化试剂 | 第23页 |
| ·蛋白复性试剂 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot试剂 | 第24-25页 |
| 3 实验方法 | 第25-37页 |
| ·感受态细菌的制备 | 第25页 |
| ·表达菌株的获取和诱导表达 | 第25-26页 |
| ·PCR法获取鼠Nanog的亚克隆 | 第25页 |
| ·Nanog表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·表达菌株的获取和诱导表达 | 第26页 |
| ·表达条件的优化 | 第26页 |
| ·菌体的裂解与粗处理 | 第26-27页 |
| ·蛋白的复性 | 第27页 |
| ·蛋白的纯化与酶切 | 第27页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第27-28页 |
| ·Western blot检测蛋白 | 第28-29页 |
| ·蛋白定量 | 第29-30页 |
| ·蛋白内毒素的测定 | 第30页 |
| ·蛋白偶联TLR7小分子激动剂 | 第30页 |
| ·蛋白偶联度的测定 | 第30-31页 |
| ·F9细胞的培养 | 第31-32页 |
| ·细胞的复苏 | 第31页 |
| ·细胞的换液 | 第31页 |
| ·细胞的传代 | 第31-32页 |
| ·细胞的冻存 | 第32页 |
| ·小鼠原代DC细胞的诱导与培养 | 第32-33页 |
| ·小鼠脾脏淋巴细胞的分离与培养 | 第33页 |
| ·淋巴细胞共培养 | 第33-34页 |
| ·LDH法测定CTL | 第34页 |
| ·ELISA测定细胞因子IL-12/IFN-γ | 第34-35页 |
| ·动物免疫免疫程序 | 第35页 |
| ·荷瘤生存实验 | 第35-37页 |
| 第三章 实验结果 | 第37-55页 |
| 1 原核表达载体的构建与蛋白的纯化 | 第37-46页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第37-39页 |
| ·PCR法扩增NANOG片段 | 第37-38页 |
| ·p GEX-KG-Nanog重组表达质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·Nanog基因的诱导表达及其条件的优化 | 第39-46页 |
| ·蛋白的Western blot鉴定 | 第46页 |
| 2 蛋白的偶联与检测 | 第46-51页 |
| ·蛋白的偶联 | 第46-48页 |
| ·用紫外法测定蛋白偶联 | 第48-49页 |
| ·蛋白样品内毒素的检测 | 第49-51页 |
| 3 疫苗体外免疫功能的影响 | 第51-53页 |
| ·TLR7-Nanog对淋巴细胞表达IL-12的影响 | 第51页 |
| ·TLR7-Nanog对淋巴细胞表达IFN-γ 的影响 | 第51-52页 |
| ·TLR7-Nanog对CTL的影响 | 第52-53页 |
| 4 疫苗对荷瘤小鼠生存时间的影响 | 第53-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
