| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| ·橡胶树炭疽病发生情况 | 第11页 |
| ·橡胶树炭疽病菌及其侵染特点 | 第11-12页 |
| ·植物与病原微生物的相互作用 | 第12-15页 |
| ·病原相关分子模式触发性免疫(PTI) | 第13-14页 |
| ·效应因子触发性免疫(ETI) | 第14-15页 |
| ·植物真菌效应蛋白的研究进展 | 第15-16页 |
| ·LysM型效应蛋白 | 第16-17页 |
| ·RNAi技术在丝状真菌中的应用 | 第17页 |
| ·丝状真菌原生质体表达体系 | 第17-18页 |
| ·实验目的意义 | 第18-19页 |
| ·主要技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| ·植物材料、菌株、质粒、试剂 | 第20页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| ·培养基和试剂配方 | 第21-22页 |
| ·橡胶树炭疽病菌基因组DNA和总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·CTAB法提取橡胶树炭疽病菌的基因组DNA(吴志红等,2001) | 第22-23页 |
| ·橡胶炭疽病菌总RNA提取 | 第23页 |
| ·橡胶树炭疽病菌CgLsyM基因的克隆 | 第23-24页 |
| ·橡胶树胶孢炭疽病菌CgLysM基因生物信息学分析 | 第24页 |
| ·载体的构建 | 第24-25页 |
| ·pCB1532-ToxA-CgLysM-GFP载体的构建 | 第24页 |
| ·CgLysMRNAi载体的构建 | 第24-25页 |
| ·Pucl9-35S-CgLysM-FLAG载体的构建 | 第25页 |
| ·橡胶树炭疽病菌对潮霉素B的敏感性检测 | 第25页 |
| ·用氯化铯密度梯度离心的方法大提质粒 | 第25-26页 |
| ·橡胶树胶胞炭疽病菌原生质体的制备和转化 | 第26-27页 |
| ·橡胶树胶胞炭疽病菌原生质体的制备 | 第26-27页 |
| ·様胶树胶胞炭疽病菌原生质体转化 | 第27页 |
| ·胶孢炭疽病菌转化子的鉴定 | 第27-28页 |
| ·含GFP基因转化子的鉴定 | 第27页 |
| ·CgLysM基因RNAi突变体的鉴定 | 第27-28页 |
| ·转化子菌落表型的观察和菌落直径的测量 | 第28页 |
| ·转化子孢子计数和菌丝的观察 | 第28页 |
| ·橡胶树离体叶片的接种实验 | 第28页 |
| ·牙管和附着孢的观察与统计分析 | 第28页 |
| ·CgLysM效应蛋白对植物细胞PTI的影响 | 第28-31页 |
| ·拟南芥原生质体制备 | 第28-29页 |
| ·原生质体瞬时表达融合蛋白 | 第29页 |
| ·Western blot的检测 | 第29-30页 |
| ·双荧光素酶报告系统分析 | 第30-31页 |
| 3 实验结果与分析 | 第31-43页 |
| ·胶胞炭疽病菌转化体系的建立 | 第31-33页 |
| ·橡胶树胶胞炭疽病菌原生质体的制备 | 第31页 |
| ·抗性转化子的获得和分子鉴定 | 第31-32页 |
| ·炭疽病菌GFP基因转化子的观察 | 第32-33页 |
| ·CgLysM效应蛋白基因的扩增及相关生物信息学分析 | 第33-35页 |
| ·CgLysM效应蛋白基因的扩增 | 第33页 |
| ·CgLysM效应蛋白基因相关生物信息学分析 | 第33-35页 |
| ·CgLysM与其它真菌中LysM型效应蛋白的同源性分析 | 第35页 |
| ·炭疽病菌CgLsyM的RNAi突变体构建 | 第35-37页 |
| ·RNAi 载体 pSilent-F-R 的构建 | 第35-36页 |
| ·橡胶树胶孢疽病菌对抗生素敏感性检测 | 第36-37页 |
| ·胶孢炭疽病菌CgLysM基因RNAi转化子的分子鉴定 | 第37页 |
| ·CgLsyM的RNAi突变体表型的分析 | 第37-39页 |
| ·CgLysM的RNAi突变体的菌落生长情况 | 第37-38页 |
| ·CgLysM的RNAi突变体菌丝和孢子形态观察 | 第38-39页 |
| ·CgLsyM基因RNAi突变体的致病性分析 | 第39-40页 |
| ·CgLsyM效应蛋白的表达分布 | 第40-42页 |
| ·pCB1532-ToxA-CgLysM-GFP载体的构建 | 第40页 |
| ·炭疽病菌CgLysM-GFP转化子获得及该蛋白在菌丝体中的分布 | 第40-41页 |
| ·炭疽病菌CgLysM-GFP在分生孢子中的分布 | 第41页 |
| ·炭疽病菌CgLysM-GFP在分生孢子萌发过程中的分布 | 第41-42页 |
| ·CgLysM效应蛋白对植物细胞PTI的影响 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 附录 | 第53-57页 |
| 附录一 PCR反应所用引物 | 第53-54页 |
| 附录二 凝胶片段回收 | 第54页 |
| 附录三 转化反应 | 第54-55页 |
| 附录四 碱裂解法提取质粒 | 第55-56页 |
| 附录五 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
