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橡胶树炭疽病菌效应蛋白基因GgLysM的RNAi突变体构建及其蛋白的亚细胞定位

摘要第1-6页
Abstract第6-8页
目录第8-11页
1 前言第11-20页
   ·橡胶树炭疽病发生情况第11页
   ·橡胶树炭疽病菌及其侵染特点第11-12页
   ·植物与病原微生物的相互作用第12-15页
     ·病原相关分子模式触发性免疫(PTI)第13-14页
     ·效应因子触发性免疫(ETI)第14-15页
   ·植物真菌效应蛋白的研究进展第15-16页
   ·LysM型效应蛋白第16-17页
   ·RNAi技术在丝状真菌中的应用第17页
   ·丝状真菌原生质体表达体系第17-18页
   ·实验目的意义第18-19页
   ·主要技术路线第19-20页
2 材料与方法第20-31页
   ·植物材料、菌株、质粒、试剂第20页
   ·实验仪器第20-21页
   ·培养基和试剂配方第21-22页
   ·橡胶树炭疽病菌基因组DNA和总RNA的提取第22-23页
     ·CTAB法提取橡胶树炭疽病菌的基因组DNA(吴志红等,2001)第22-23页
     ·橡胶炭疽病菌总RNA提取第23页
   ·橡胶树炭疽病菌CgLsyM基因的克隆第23-24页
   ·橡胶树胶孢炭疽病菌CgLysM基因生物信息学分析第24页
   ·载体的构建第24-25页
     ·pCB1532-ToxA-CgLysM-GFP载体的构建第24页
     ·CgLysMRNAi载体的构建第24-25页
     ·Pucl9-35S-CgLysM-FLAG载体的构建第25页
   ·橡胶树炭疽病菌对潮霉素B的敏感性检测第25页
   ·用氯化铯密度梯度离心的方法大提质粒第25-26页
   ·橡胶树胶胞炭疽病菌原生质体的制备和转化第26-27页
     ·橡胶树胶胞炭疽病菌原生质体的制备第26-27页
     ·様胶树胶胞炭疽病菌原生质体转化第27页
   ·胶孢炭疽病菌转化子的鉴定第27-28页
     ·含GFP基因转化子的鉴定第27页
     ·CgLysM基因RNAi突变体的鉴定第27-28页
   ·转化子菌落表型的观察和菌落直径的测量第28页
   ·转化子孢子计数和菌丝的观察第28页
   ·橡胶树离体叶片的接种实验第28页
   ·牙管和附着孢的观察与统计分析第28页
   ·CgLysM效应蛋白对植物细胞PTI的影响第28-31页
     ·拟南芥原生质体制备第28-29页
     ·原生质体瞬时表达融合蛋白第29页
     ·Western blot的检测第29-30页
     ·双荧光素酶报告系统分析第30-31页
3 实验结果与分析第31-43页
   ·胶胞炭疽病菌转化体系的建立第31-33页
     ·橡胶树胶胞炭疽病菌原生质体的制备第31页
     ·抗性转化子的获得和分子鉴定第31-32页
     ·炭疽病菌GFP基因转化子的观察第32-33页
   ·CgLysM效应蛋白基因的扩增及相关生物信息学分析第33-35页
     ·CgLysM效应蛋白基因的扩增第33页
     ·CgLysM效应蛋白基因相关生物信息学分析第33-35页
     ·CgLysM与其它真菌中LysM型效应蛋白的同源性分析第35页
   ·炭疽病菌CgLsyM的RNAi突变体构建第35-37页
     ·RNAi 载体 pSilent-F-R 的构建第35-36页
     ·橡胶树胶孢疽病菌对抗生素敏感性检测第36-37页
     ·胶孢炭疽病菌CgLysM基因RNAi转化子的分子鉴定第37页
   ·CgLsyM的RNAi突变体表型的分析第37-39页
     ·CgLysM的RNAi突变体的菌落生长情况第37-38页
     ·CgLysM的RNAi突变体菌丝和孢子形态观察第38-39页
   ·CgLsyM基因RNAi突变体的致病性分析第39-40页
   ·CgLsyM效应蛋白的表达分布第40-42页
     ·pCB1532-ToxA-CgLysM-GFP载体的构建第40页
     ·炭疽病菌CgLysM-GFP转化子获得及该蛋白在菌丝体中的分布第40-41页
     ·炭疽病菌CgLysM-GFP在分生孢子中的分布第41页
     ·炭疽病菌CgLysM-GFP在分生孢子萌发过程中的分布第41-42页
   ·CgLysM效应蛋白对植物细胞PTI的影响第42-43页
4 讨论第43-45页
5 结论第45-46页
参考文献第46-53页
附录第53-57页
 附录一 PCR反应所用引物第53-54页
 附录二 凝胶片段回收第54页
 附录三 转化反应第54-55页
 附录四 碱裂解法提取质粒第55-56页
 附录五 SDS-PAGE凝胶电泳第56-57页
致谢第57页

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