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氧化固醇结合蛋白8重组腺病毒构建及相关功能研究

摘要第1-4页
Abstracts第4-7页
第一章 前言第7-19页
 1 腺病毒简介第7-10页
   ·腺病毒的毒粒结构第7-8页
   ·腺病毒的复制第8-9页
   ·腺病毒的基因转录第9-10页
   ·腺病毒与肿瘤第10页
   ·腺病毒作为基因治疗的载体第10页
 2 氧化固醇第10-12页
 3 氧化固醇的功能第12-13页
 4 氧化固醇结合蛋白第13-14页
 5 ORP8第14-17页
 6 Nup62第17页
 7 研究目的、意义与创新点第17-19页
   ·研究目的第17-18页
   ·研究意义与创新点第18-19页
第二章 实验材料、实验仪器与试剂第19-27页
 1 实验材料第19-20页
   ·菌株、质粒、细胞第19页
   ·试剂盒与主要试剂第19-20页
   ·引物合成与序列测定第20页
 2 主要仪器第20-22页
 3 主要试剂配制第22-27页
   ·基因克隆及蛋白表达纯化常用试剂配制第22页
   ·质粒大抽用试剂第22-24页
   ·凝胶电泳所需试剂配制第24-25页
   ·Western blotting 所需试剂配制第25页
   ·细胞培养常用试剂的配制第25-26页
   ·抗生素的配制第26页
   ·GST-Pulldown 所需试剂第26-27页
第三章 实验方法第27-46页
 1 重组腺病毒构建第27-41页
   ·载体构建第28-36页
   ·重组腺病毒包装第36-39页
   ·重组腺病毒纯化第39-41页
 2 ORP8 相关功能研究第41-46页
   ·构建 pET-22b-exo70 和 pGEX-4T-1-nup62(328-522)质粒第41-44页
   ·蛋白表达纯化及鉴定第44-45页
   ·GST-pulldown第45-46页
第四章 结果与分析第46-55页
 1 ORP8 重组腺病毒构建第46-52页
   ·构建骨架质粒 pDown-mcs-IRES/EGFP-ORP8第46-47页
   ·利用 Gateway Technology 构建 pAV.EX1d-OSBPL8/IRES/eGFP第47-48页
   ·腺病毒包装第48-49页
   ·病毒纯化第49-51页
   ·病毒滴度测定第51-52页
 2 ORP8 相关功能研究第52-55页
   ·构建 pET-22b-exo70 和 pGEX-4T-1-nup62(328-522)质粒第52-53页
   ·蛋白表达检测及纯化结果考染第53-54页
   ·GST pulldown 证明 exo70 和 ORP8 竞争结合 nup62第54-55页
第五章 讨论第55-58页
参考文献第58-62页
附录第62-76页
 附录一 缩写词中英文对照第62-64页
 附录二 关于 ORP family 在不同机体中的功能现有的信息总结第64-65页
 附录三 Genebank 公布的 ORP8 基因 cDNA 序列第65-76页
在学期间发表论文清单第76-77页
致谢第77页

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