摘要 | 第1-4页 |
Abstracts | 第4-7页 |
第一章 前言 | 第7-19页 |
1 腺病毒简介 | 第7-10页 |
·腺病毒的毒粒结构 | 第7-8页 |
·腺病毒的复制 | 第8-9页 |
·腺病毒的基因转录 | 第9-10页 |
·腺病毒与肿瘤 | 第10页 |
·腺病毒作为基因治疗的载体 | 第10页 |
2 氧化固醇 | 第10-12页 |
3 氧化固醇的功能 | 第12-13页 |
4 氧化固醇结合蛋白 | 第13-14页 |
5 ORP8 | 第14-17页 |
6 Nup62 | 第17页 |
7 研究目的、意义与创新点 | 第17-19页 |
·研究目的 | 第17-18页 |
·研究意义与创新点 | 第18-19页 |
第二章 实验材料、实验仪器与试剂 | 第19-27页 |
1 实验材料 | 第19-20页 |
·菌株、质粒、细胞 | 第19页 |
·试剂盒与主要试剂 | 第19-20页 |
·引物合成与序列测定 | 第20页 |
2 主要仪器 | 第20-22页 |
3 主要试剂配制 | 第22-27页 |
·基因克隆及蛋白表达纯化常用试剂配制 | 第22页 |
·质粒大抽用试剂 | 第22-24页 |
·凝胶电泳所需试剂配制 | 第24-25页 |
·Western blotting 所需试剂配制 | 第25页 |
·细胞培养常用试剂的配制 | 第25-26页 |
·抗生素的配制 | 第26页 |
·GST-Pulldown 所需试剂 | 第26-27页 |
第三章 实验方法 | 第27-46页 |
1 重组腺病毒构建 | 第27-41页 |
·载体构建 | 第28-36页 |
·重组腺病毒包装 | 第36-39页 |
·重组腺病毒纯化 | 第39-41页 |
2 ORP8 相关功能研究 | 第41-46页 |
·构建 pET-22b-exo70 和 pGEX-4T-1-nup62(328-522)质粒 | 第41-44页 |
·蛋白表达纯化及鉴定 | 第44-45页 |
·GST-pulldown | 第45-46页 |
第四章 结果与分析 | 第46-55页 |
1 ORP8 重组腺病毒构建 | 第46-52页 |
·构建骨架质粒 pDown-mcs-IRES/EGFP-ORP8 | 第46-47页 |
·利用 Gateway Technology 构建 pAV.EX1d-OSBPL8/IRES/eGFP | 第47-48页 |
·腺病毒包装 | 第48-49页 |
·病毒纯化 | 第49-51页 |
·病毒滴度测定 | 第51-52页 |
2 ORP8 相关功能研究 | 第52-55页 |
·构建 pET-22b-exo70 和 pGEX-4T-1-nup62(328-522)质粒 | 第52-53页 |
·蛋白表达检测及纯化结果考染 | 第53-54页 |
·GST pulldown 证明 exo70 和 ORP8 竞争结合 nup62 | 第54-55页 |
第五章 讨论 | 第55-58页 |
参考文献 | 第58-62页 |
附录 | 第62-76页 |
附录一 缩写词中英文对照 | 第62-64页 |
附录二 关于 ORP family 在不同机体中的功能现有的信息总结 | 第64-65页 |
附录三 Genebank 公布的 ORP8 基因 cDNA 序列 | 第65-76页 |
在学期间发表论文清单 | 第76-77页 |
致谢 | 第77页 |