| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-15页 |
| 第1章 前言 | 第15-30页 |
| ·前列腺癌的基因治疗 | 第15-16页 |
| ·条件复制型腺病毒 | 第16-17页 |
| ·CXCR4在前列腺癌细胞与前列腺上皮细胞中的表达差异 | 第17-30页 |
| ·实验材料 | 第19-22页 |
| ·实验方法 | 第22-26页 |
| ·实验结果 | 第26-30页 |
| 第2章 CXCR4启动子的克隆及其在前列腺癌细胞中转录特异性分析 | 第30-50页 |
| ·实验材料 | 第31-36页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·主要试剂的配制 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-42页 |
| ·细胞DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·启动子的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·CXCR4启动子克隆载体的构建 | 第38-40页 |
| ·启动子功能分析载体的构建 | 第40-41页 |
| ·pDsRed2-1-CXCR4分别转染前列腺癌细胞LNCaP,PC-3及人前列腺上皮细胞RWPE-1,检测红色荧光蛋白的表达 | 第41页 |
| ·pGL4.17-CXCR4转染及荧光素酶活性的检测 | 第41-42页 |
| ·统计学分析 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-50页 |
| ·目的基因的扩增 | 第42-43页 |
| ·CXCR4启动子与T载体pTA2克隆重组子鉴定结果 | 第43页 |
| ·重组质粒pTA2-CXCR4的酶切鉴定 | 第43-45页 |
| ·重组质粒pDsRed2-1-CXCR4和pGL4.17-CXCR4的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·CXCR4启动子调控质粒pDsRed2-1中DsRed2红色荧光蛋白的表达 | 第46-47页 |
| ·CXCR4启动子调控luciferase转录活性检测 | 第47-50页 |
| 第3章 CXCR4调控的条件复制型腺病毒对人前列腺癌细胞特异性杀伤作用 | 第50-80页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第51-52页 |
| ·主要试剂的配置 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-63页 |
| ·人胚肾293细胞的培养 | 第52-53页 |
| ·人胚肾293细胞DNA的提取 | 第53页 |
| ·E1片段的克隆 | 第53-55页 |
| ·重组腺病毒穿梭质粒pShuttle-CXCR4-E1的构建 | 第55-57页 |
| ·构建重组腺病毒质粒pAd-CXCR4-E1 | 第57-59页 |
| ·人胚肾293细胞包装条件复制型腺病毒 | 第59-60页 |
| ·病毒DNA的抽提 | 第60页 |
| ·PCR鉴定重组腺病毒 | 第60页 |
| ·病毒的大量制备及滴度测定 | 第60-61页 |
| ·实验分组及病毒感染细胞 | 第61页 |
| ·Western Blot检测E1基因的蛋白表达 | 第61页 |
| ·细胞台盼蓝染色 | 第61-62页 |
| ·结晶紫染色法检测病毒对细胞毒性 | 第62页 |
| ·Annexin V-FITC、PI染色流式细胞术 | 第62页 |
| ·Ad-CXCR4-E1病毒对LNCaP细胞杀伤的量效关系、时效关系 | 第62-63页 |
| ·统计学分析 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-80页 |
| ·E1片段的克隆 | 第63-64页 |
| ·重组腺病毒穿梭质粒pShuttle-CXCR4-E1鉴定 | 第64-66页 |
| ·重组腺病毒质粒pAd-CXCR4-E1阳性克隆的鉴定 | 第66-67页 |
| ·PCR鉴定重组腺病毒Ad-CXCR4-E1 | 第67-68页 |
| ·重组病毒Ad-CXCR4-E1感染LNCaP,PC-3及RWPE-1 | 第68-70页 |
| ·Ad-CXCR4-E1感染后各组细胞中E1蛋白表达 | 第70页 |
| ·台盼蓝染色检测细胞坏死 | 第70-72页 |
| ·结晶紫染色法检测病毒对细胞毒性 | 第72-73页 |
| ·Annexin V-FITC、PI染色,流式细胞术检测细胞坏死 | 第73-75页 |
| ·Ad-CXCR4-E1病毒对LNCaP、PC-3细胞杀伤的剂效关系 | 第75-77页 |
| ·Ad-CXCR4-E1病毒对LNCaP、PC-3细胞杀伤的时效关系 | 第77-80页 |
| 第4章 讨论 | 第80-91页 |
| ·条件复制型腺病毒与前列腺癌 | 第80-83页 |
| ·针对前列腺癌的条件复制型腺病毒的设计思路 | 第80-81页 |
| ·前列腺癌基因治疗的靶点 | 第81-83页 |
| ·条件复制型腺病毒靶向治疗的策略 | 第83-87页 |
| ·条件复制型腺病毒靶向治疗的分子机制 | 第84-86页 |
| ·存在问题 | 第86-87页 |
| ·干细胞荷载溶瘤病毒——CXCR4可否成为前列腺癌与骨髓间充质干细胞共特异的启动子? | 第87-91页 |
| 第5章 结论 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-99页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第99-100页 |
| 综述 | 第100-112页 |
| 参考文献 | 第109-112页 |
