| 摘要 | 第1-18页 |
| Abstract | 第18-26页 |
| 前言 | 第26-28页 |
| 第一部分 EGFR 第 19 外显子缺失突变 NSCLC 细胞株 NCI-H1650 在TKI 作用下的生物学变化及耐药产生机制 | 第28-48页 |
| 前言 | 第28-29页 |
| 材料和方法 | 第29-38页 |
| 1. 材料 | 第29-30页 |
| ·细胞系 | 第29页 |
| ·药品 | 第29页 |
| ·主要实验器材 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| 2. 方法 | 第30-38页 |
| ·Gefitinib 耐药细胞株 NCI-H1650/GR 的建立 | 第30-33页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1650/GR 的生物学特征 | 第33-34页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1650/GR 的 EGFR 信号通路部分节点蛋白的检测 | 第34-37页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1650/GR 的 EMT 相关蛋白检测26 | 第37页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1650/GR 的 EGFR 和 KRAS 基因突变 检测 | 第37页 |
| ·免疫细胞化学的判断标准 | 第37页 |
| ·统计学方法 | 第37-38页 |
| 结果 | 第38-43页 |
| 1. Gefitinib 耐药细胞株 NCI-H1650/GR 的建立 | 第38-39页 |
| ·NCI-H1650 细胞 EGFR 和 KRAS 基因突变 | 第38页 |
| ·MTT 法检测细胞抑制率和耐药指数 | 第38-39页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1650/GR 的 gefitinib 作用生长抑制曲线 | 第39页 |
| 2. 耐药细胞株 NCI-H1650/GR 的生物学特征 | 第39-41页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1650/GR 细胞形态学 | 第39-40页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1650/GR 生长曲线和群体倍增时间 | 第40页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1650/GR 细胞周期分布 | 第40-41页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1650/GR 细胞凋亡 | 第41页 |
| 3. 耐药细胞株 NCI-H1650/GR 的 EGFR 信号通路部分节点蛋白表达 | 第41-42页 |
| ·免疫细胞化学法检测 EGFR、pY1068-EGFR、KRAS 和BRAF 蛋白表达 | 第41-42页 |
| ·Western-Blotting 法检测 EGFR、pY1068-EGFR、KRAS 和BRAF蛋白表达 | 第42页 |
| 4. 耐药细胞株 NCI-H1650/GR 的 EMT | 第42-43页 |
| ·E-cadherin 蛋白表达 | 第42页 |
| ·vimentin 蛋白表达 | 第42-43页 |
| 5. 耐药细胞株 NCI-H1650/GR 基因突变 | 第43页 |
| 讨论 | 第43-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 第二部分 EGFR T790M突变 NSCLC 细胞株 NCI-H1975 在 TKI 作用下的生物学变化及耐药产生机制 | 第48-59页 |
| 前言 | 第48页 |
| 材料和方法 | 第48-50页 |
| 1. 材料 | 第48页 |
| ·细胞系 | 第48页 |
| ·药品、实验器材及实验试剂 | 第48页 |
| 2. 方法 | 第48-50页 |
| ·Gefitinib 耐药细胞株 NCI-H1975/GR 的建立 | 第48-49页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1975/GR 的生物学特征 | 第49页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1975/GR EGFR 信号通路部分节点蛋白的检测 | 第49-50页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1975/GR 的 EMT 相关蛋白检测 | 第50页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1975/GR EGFR 和 KRAS 基因突变的检测 | 第50页 |
| ·免疫细胞化学的判断标准 | 第50页 |
| ·统计学方法 | 第50页 |
| 结果 | 第50-55页 |
| 1. Gefitinib 耐药细胞株 NCI-H1975/GR 的建立 | 第50-51页 |
| ·NCI-H1975 细胞 EGFR 和 KRAS 基因突变 | 第50页 |
| ·MTT 法检测细胞抑制率和耐药指数 | 第50-51页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1975/GR 的 gefitinib 作用生长抑制曲线 | 第51页 |
| 2. 耐药细胞株 NCI-H1975/GR 的生物学特征 | 第51-54页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1975/GR 细胞形态学 | 第51-52页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1975/GR 生长曲线和群体倍增时间 | 第52页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1975/GR 细胞周期分布 | 第52-53页 |
| ·耐药细胞株 NCI-H1975/GR 细胞凋亡 | 第53-54页 |
| 3. 耐药细胞株 NCI-H1975/GR 的 EGFR 信号通路部分节点蛋白表达 | 第54-55页 |
| ·免疫细胞化学法检测 EGFR、pY1068-EGFR、KRAS 和BRAF 蛋白表达 | 第54页 |
| ·Western-Blotting 法检测 EGFR、pY1068-EGFR、KRAS 和BRAF 蛋白表达 | 第54-55页 |
| 4. 耐药细胞株 NCI-H1975/GR 的 EMT | 第55页 |
| ·E-cadherin 蛋白表达 | 第55页 |
| ·vimentin 蛋白表达 | 第55页 |
| 5. 耐药细胞株 NCI-H1975/GR 的 EGFR 和 KRAS 基因突变 | 第55页 |
| 讨论 | 第55-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 第三部分 细胞株 NCI-H1650 和 NCI-H1975 在 TKI 作用下错配修复蛋白 hMSH2 和 hMLH1 表达的变化 | 第59-67页 |
| 前言 | 第59-60页 |
| 材料和方法 | 第60-63页 |
| 1.材料 | 第60-61页 |
| ·细胞系 | 第60页 |
| ·主要实验器材 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60-61页 |
| 2.方法 | 第61-63页 |
| ·Giefitinib 耐药细胞株 NCI-H1650/GR 和 NCI-H1975/GR的建立 | 第61页 |
| ·免疫细胞化法检测错配修复蛋白 hMSH2 和 hMLH1 的表达 | 第61页 |
| ·Western-Blotting 法检测配修复蛋白 hMSH2 和 hMLH1的表达 | 第61页 |
| ·实时荧光定量 PCR 法检测错配修复蛋白 hMSH2 mRNA在 NCI-H1975 和 NCI-H1975/GR 细胞中的表达 | 第61-62页 |
| ·免疫细胞化学的判断标准 | 第62页 |
| ·统计学方法 | 第62-63页 |
| 结果 | 第63-65页 |
| 1.免疫细胞化法检测错配修复蛋白 hMSH2 和 hMLH1 的表达 | 第63页 |
| ·NCI-H1975 和 NCI-H1975/GR 细胞错配修复蛋白hMSH2 和 hMLH1 的表达 | 第63页 |
| ·NCI-H1650 和 NCI-H1650/GR 细胞错配修复蛋白hMSH2 和 hMLH1 的表达 | 第63页 |
| 2. Western-Blotting 法检测配修复蛋白 hMSH2 和 hMLH1 的表达 | 第63-64页 |
| ·NCI-H1975 和 NCI-H1975/GR 细胞错配修复蛋白hMSH2 和 hMLH1 的表达 | 第63页 |
| ·NCI-H1650 和 NCI-H1650/GR 细胞错配修复蛋白hMSH2 和 hMLH1 的表达 | 第63-64页 |
| 3. 实时荧光定量 PCR 法检测错配修复蛋白 hMSH2 mRNA在 NCI-H1975 和 NCI-H1975/GR 细胞中的表达 | 第64-65页 |
| 讨论 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 附表 | 第68-69页 |
| 附图 | 第69-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 综述 | 第82-97页 |
| 参考文献 | 第90-97页 |
| 攻读学位期间发表文章情况及参与课题 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
