| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-17页 |
| 1 绪论 | 第17-33页 |
| ·引言 | 第17页 |
| ·FIPs与免疫球蛋白结构和活性的相似性 | 第17-18页 |
| ·免疫球蛋白的结构及其性质 | 第18页 |
| ·免疫球蛋白的生产及应用 | 第18页 |
| ·真菌免疫调节蛋白 | 第18-24页 |
| ·真菌免疫调节蛋白的生物学特征 | 第19-20页 |
| ·真菌免疫调节蛋白的结构特征 | 第20-22页 |
| ·真菌免疫调节蛋白生物活性 | 第22-23页 |
| ·真菌免疫调节蛋白基因克隆表达研究 | 第23-24页 |
| ·金针菇免疫调节蛋白(FIP-fve) | 第24-28页 |
| ·金针菇免疫调节蛋白性质及生物活性 | 第25-26页 |
| ·金针菇免疫调节蛋白应用前景 | 第26-28页 |
| ·功能基因的表达系统 | 第28-29页 |
| ·Escherichia coli表达系统 | 第28页 |
| ·真核表达系统 | 第28-29页 |
| ·本课题研究目的意义 | 第29-30页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第30-33页 |
| ·研究内容 | 第30-32页 |
| ·技术路线 | 第32-33页 |
| 2 金针菇免疫调节蛋白基因克隆His-FIP-fve表达研究 | 第33-57页 |
| ·实验材料与仪器 | 第33-34页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-44页 |
| ·原核表达载体pET30-FIP-fve的构建 | 第34-40页 |
| ·重组蛋白His-FIP-fve表达优化 | 第40-43页 |
| ·重组融合蛋白His-FIP-fve纯化 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-54页 |
| ·RNA模板制备 | 第44-45页 |
| ·质粒制备 | 第45页 |
| ·RT-PCR反应产物鉴定 | 第45-46页 |
| ·克隆载体pUC-FIP-fve鉴定与测序 | 第46-47页 |
| ·表达载体pET-FIP-fve双酶切鉴定及基因测序 | 第47-48页 |
| ·pET30-FIP-fve表达蛋白序列预测 | 第48-49页 |
| ·表达载体pET30-FIP-fve诱导表达 | 第49页 |
| ·表达载体pET30-FIP-fve原核表达产物纯化 | 第49-53页 |
| ·重组蛋白His-FIP-fve冻干工艺 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·基因重组技术 | 第54页 |
| ·重组蛋白可溶性表达 | 第54-55页 |
| ·菌体裂解技术 | 第55页 |
| ·重组蛋白纯化工艺 | 第55页 |
| ·小结 | 第55-57页 |
| 3 金针菇免疫调节蛋白Gst-FIP-fve表达研究 | 第57-63页 |
| ·材料与方法 | 第57-59页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-59页 |
| ·结果 | 第59-61页 |
| ·表达载体pGEX-4t-1-FIP-fve双酶切 | 第59页 |
| ·表达载体pGEX-4t-1-FlP-fve诱导表达Gst-融合蛋白 | 第59-60页 |
| ·重组Gst-融合蛋白纯化 | 第60-61页 |
| ·Gst-FIP-fve融合蛋白Gst标签去除 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 4 重组His-FIP-fve二级结构、生物活性及机制初步研究 | 第63-72页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·试验动物及受试药物 | 第63页 |
| ·试剂和器材 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-65页 |
| ·圆二色谱(CD)分析蛋白二级结构 | 第63页 |
| ·动物试验 | 第63-64页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第64页 |
| ·重组蛋白诱导细胞因子基因表达的影响 | 第64-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-69页 |
| ·His-FIP-fve二级结构分析 | 第65-66页 |
| ·重组His-FIP-fve对小鼠体内细胞因子含量的影响 | 第66-68页 |
| ·重组His-FIP-fve诱导细胞因子IL-2和IFN-γ基因表达的影响 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| ·重组蛋白His-FIP-fve二级结构重要性 | 第69页 |
| ·重组蛋白His-FIP-fve活性试验意义 | 第69页 |
| ·重组蛋白His-FIP-fve与天然蛋白活性的相似性 | 第69-70页 |
| ·过敏症疾病的预防和治疗 | 第70页 |
| ·未来研究重点 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 5 金针菇免疫调节蛋白基因表达特性研究 | 第72-88页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·菌种 | 第72页 |
| ·仪器、设备和试剂 | 第72-73页 |
| ·方法 | 第73-78页 |
| ·金针菇栽培 | 第73页 |
| ·金针菇菌丝体培养 | 第73-74页 |
| ·RNA提取 | 第74页 |
| ·金针菇内参基因序列筛选 | 第74-75页 |
| ·金针菇real-time PCR引物设计 | 第75页 |
| ·RT-PCR进行内参基因验证 | 第75页 |
| ·通过Real-time PCR研究FIP-fve表达特性 | 第75-76页 |
| ·通过RT-PCR研究FIP-fve表达特性 | 第76页 |
| ·His-FIP-fve多克隆抗体的制备 | 第76页 |
| ·蛋白提取 | 第76页 |
| ·蛋白免疫印迹试验(western-blot) | 第76-78页 |
| ·结果 | 第78-85页 |
| ·金针菇不同品种栽培实验 | 第78-79页 |
| ·金针菇菌丝体培养 | 第79页 |
| ·金针菇总RNA提取 | 第79-80页 |
| ·RT-PCR筛选内参 | 第80页 |
| ·通过RT-PCR研究FIP-fve基因表达特性 | 第80-81页 |
| ·通过Real-time研究FIP-fve基因表达特性 | 第81-82页 |
| ·通过Western-blot研究FIP-fve表达特性 | 第82-85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第85页 |
| ·蛋白质印迹分析(Western-blot Analysis) | 第85-86页 |
| ·关于内参 | 第86页 |
| ·小结 | 第86-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-102页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
