| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第1章 概述 | 第13-23页 |
| ·蛇足石杉生物及生态学特征研究 | 第13-15页 |
| ·蛇足石杉的生物学特征 | 第13-14页 |
| ·蛇足石杉的分布及生长繁殖 | 第14-15页 |
| ·石杉碱甲资源研究概述 | 第15-17页 |
| ·石杉碱种类研究现状 | 第15-16页 |
| ·石杉碱甲含量及资源状况 | 第16-17页 |
| ·石杉碱甲分离与检测 | 第17页 |
| ·蛇足石杉体外培养 | 第17-18页 |
| ·蛇足石杉内生菌 | 第18页 |
| ·石杉碱甲的化学合成 | 第18-19页 |
| ·石杉碱甲的生物合成机制 | 第19-21页 |
| ·研究目的和意义 | 第21页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第21-23页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| ·本研究的技术路线 | 第22-23页 |
| 第2章 湘西产蛇足石杉中石杉碱甲、乙和丙的含量测定及比较 | 第23-33页 |
| ·材料与试剂 | 第23-24页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·仪器 | 第23页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-25页 |
| ·对照品溶液的制备 | 第24页 |
| ·供试品溶液的制备 | 第24页 |
| ·色谱条件 | 第24-25页 |
| ·样品分析 | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-31页 |
| ·色谱分离 | 第25-29页 |
| ·线性关系的测定 | 第29页 |
| ·精密度试验 | 第29页 |
| ·重复性试验 | 第29-30页 |
| ·稳定性试验 | 第30页 |
| ·加样回收率试验 | 第30页 |
| ·样品石杉碱含量测定 | 第30-31页 |
| ·结论与讨论 | 第31-33页 |
| 第3章 赖氨酸脱羧酶基因的克隆及生物信息学分析 | 第33-43页 |
| ·材料与试剂 | 第33-34页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·仪器 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-37页 |
| ·总 RNA 提取及 cDNA 合成 | 第34-35页 |
| ·LDC 基因全长扩增 | 第35-36页 |
| ·JM109 感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·PCR 产物的 TA 连接 | 第36页 |
| ·转化与筛选 | 第36-37页 |
| ·重组质粒提取及测序 | 第37页 |
| ·LDC 基因的信息学分析 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-41页 |
| ·LDC 基因的克隆和序列分析 | 第37-39页 |
| ·LDC 编码蛋白的特性及结构预测 | 第39-40页 |
| ·信号肽及亚细胞定位及跨膜区域预测 | 第40页 |
| ·不同植物 LDC 氨基酸序列比对 | 第40-41页 |
| ·结论与讨论 | 第41-43页 |
| 第4章 赖氨酸脱羧酶基因的外源重组表达及功能表征 | 第43-55页 |
| ·材料与试剂 | 第43-44页 |
| ·试剂 | 第43-44页 |
| ·仪器 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-50页 |
| ·目的基因插入片段获得 | 第44-45页 |
| ·重组质粒 DNA 构建 | 第45-46页 |
| ·外源重组 DNA 的转化及阳性克隆子筛选 | 第46-47页 |
| ·重组质粒 DNA 原核表达 | 第47页 |
| ·表达产物 SDS-PAGE 检测分析 | 第47-49页 |
| ·重组表达产物制备及定量 | 第49页 |
| ·纯化表达产物的活性鉴定 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-53页 |
| ·赖氨酸脱羧酶基因的重组 | 第50-51页 |
| ·重组赖氨酸脱羧酶的原核表达 | 第51-52页 |
| ·Trx-LDC1 和 Trx-LDC2 的可溶性表达及纯化 | 第52-53页 |
| ·重组赖氨酸脱羧酶的活性鉴定 | 第53页 |
| ·结论与讨论 | 第53-55页 |
| 第5章 湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲分布及与 LDC 表达的关系 | 第55-59页 |
| ·仪器与材料 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·仪器 | 第55页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-56页 |
| ·不同部位石杉碱甲含量测定 | 第55-56页 |
| ·蛇足石杉不同部位 LDC 半定量 RT-PCR 分析 | 第56页 |
| ·蛇足石杉根、茎和叶总 RNA 提取 | 第56页 |
| ·单链 cDNA 合成及均一化 | 第56页 |
| ·赖氨酸脱羧酶基因半定量 PCR | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-58页 |
| ·不同部位石杉碱甲含量测定 | 第56-57页 |
| ·赖氨酸脱羧酶基因半定量 PCR | 第57-58页 |
| ·结论与讨论 | 第58-59页 |
| 第6章 总结与展望 | 第59-61页 |
| ·总结 | 第59页 |
| ·展望 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 作者在学期间取得的学术成果 | 第68页 |
