| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词及中英文对照 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-27页 |
| 1 盐胁迫下植物应对机理 | 第13-15页 |
| ·细胞的渗透调节 | 第13-14页 |
| ·无机盐离子吸收和分布 | 第13-14页 |
| ·合成积累有机溶质 | 第14页 |
| ·水通道蛋白的调节作用 | 第14页 |
| ·清除活性氧的膜保护系统 | 第14-15页 |
| ·光合作用途径 | 第15页 |
| ·盐胁迫信号传导途径 | 第15页 |
| 2 Ca~(2+)及相关蛋白 | 第15-21页 |
| ·CBL家族及其靶蛋白CIPK家族 | 第16-21页 |
| ·CBL家族及其结构特征 | 第16-17页 |
| ·CBL特异性相互作用蛋白CIPK家族 | 第17-18页 |
| ·CBL-CIPK复合体参与各种逆境胁迫的信号转导 | 第18-21页 |
| ·CBL-CIPK信号途径在盐胁迫下转导的分子调控机制 | 第19-20页 |
| ·CBL-CIPK信号途径在低钾胁迫下应答的途径 | 第20页 |
| ·CBL-CIPK信号途径在干旱胁迫下转导的分子调控机制 | 第20-21页 |
| ·CBL-CIPK信号参与其他胁迫应答的途径 | 第21页 |
| 3 HKT类蛋白 | 第21-25页 |
| ·HKT转运蛋白的初步研究 | 第22页 |
| ·HKT的结构与功能 | 第22-24页 |
| ·HKT蛋白的K~+/Na~+选择性与植物抗盐性 | 第24-25页 |
| 4 研究内容、意义及技术路线 | 第25-27页 |
| ·研究内容及意义 | 第25-26页 |
| ·技术路线 | 第26-27页 |
| 第二部分 研究报告 | 第27-85页 |
| 第一章 棉属野生种旱地棉(Gossypium aridum)蛋白磷酸激酶基因GarCIPK的克隆与序列分析 | 第27-49页 |
| 1 实验材料 | 第27页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌种 | 第27页 |
| 2 仪器设备、酶及试剂 | 第27-29页 |
| ·仪器与设备 | 第27-28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·常用培养基和溶液的配制 | 第28页 |
| ·实验中所用的引物 | 第28-29页 |
| 3 实验方法 | 第29-36页 |
| ·不同盐处理时期目的基因在旱地棉的叶片、根中的表达情况 | 第29-30页 |
| ·植物材料处理方法 | 第29页 |
| ·cDNA的合成 | 第29-30页 |
| ·RNA提取 | 第29-30页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第30页 |
| ·旱地棉叶片基因组DNA的提取与纯化 | 第30-31页 |
| ·实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR) | 第31-32页 |
| ·GarCIPK cDNA的获得 | 第32-33页 |
| ·GarCIPK基因组DNA全长获得 | 第33页 |
| ·回收DNA片段与T载体连接、转化 | 第33-35页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第33-34页 |
| ·回收的PCR产物与PTG19-T连接及转化大肠杆菌、挑单克隆PCR、测序 | 第34-35页 |
| ·系统进化分析 | 第35-36页 |
| ·激酶结构域Action NAF结构域比对分析 | 第36页 |
| 4 结果与分析 | 第36-46页 |
| ·蛋白磷酸激酶基因GarCIPK的克隆 | 第36-46页 |
| ·旱地棉RNA及cDNA检测 | 第36-37页 |
| ·实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR) | 第37-38页 |
| ·GarCIPK基因cDNA序列的克隆 | 第38页 |
| ·GarCIPK蛋白质氨基酸序列生物信息学分析 | 第38-44页 |
| ·系统进化及氨基酸序列分析 | 第38-40页 |
| ·蛋白结构域分析 | 第40-44页 |
| ·GarCIPK基因组及启动子序列分析 | 第44-46页 |
| 5 讨论 | 第46-49页 |
| 第二章 GarCIPK基因功能的初步鉴定 | 第49-71页 |
| 1 试验材料 | 第49页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·质粒和菌种 | 第49页 |
| 2 仪器设备与试剂 | 第49-50页 |
| ·仪器与设备 | 第49页 |
| ·培养基及常用试剂的配置 | 第49-50页 |
| ·植物生长调节剂及抗生素的配置 | 第49-50页 |
| ·组织培养用培养基及水培营养液 | 第50页 |
| 3 实验方法 | 第50-60页 |
| ·构建载体所用引物 | 第50页 |
| ·pCAMBIA2301-CaMV35S-GarCIPK植物表达载体的构建 | 第50-53页 |
| ·PCR扩增GarCIPK片段 | 第51页 |
| ·纯化的PCR产物双酶切、割胶回收 | 第51页 |
| ·载体pCAMBIA2301-CaMV35S-rbc的质粒提取,酶切及胶回收 | 第51-53页 |
| ·pCAMBIA2301载体与GarCIPK酶切片段的连接和转化 | 第53页 |
| ·拟南芥逆境胁迫特异启动子RD29A表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301-CaMV35S-GarCIPK和pCAMBIA2301-RD29A-GarCIPK的鉴定 | 第54页 |
| ·农杆菌EHA105热激感受态的制备、转化和鉴定 | 第54-55页 |
| ·植物表达载体对烟草的转化 | 第55-59页 |
| ·农杆菌菌液的活化 | 第55页 |
| ·叶盘化法侵染烟草 | 第55-56页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第56-57页 |
| ·转基因烟草RT-PCR检测 | 第57-59页 |
| ·转基因烟草功能的初步验证 | 第59-60页 |
| ·转基因烟草的表型鉴定 | 第59-60页 |
| 4 结果与分析 | 第60-68页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301-CaMV35S-GarCIPK、pCAMBIA2301-RD29A-GarCIPK的构建 | 第60-62页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301-CaMV35S-GarCIPK的构建 | 第60-61页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301-RD29A-GarCIPK的构建 | 第61-62页 |
| ·农杆菌转化检测 | 第62-63页 |
| ·转基因烟草抗性苗的获得和检测 | 第63-66页 |
| ·转基因烟草抗性植株的PCR检测 | 第63-65页 |
| ·转基因烟草阳性植株的RT-PCR检测 | 第65-66页 |
| ·转基因植株的抗逆性鉴定 | 第66-68页 |
| 5 讨论 | 第68-71页 |
| 第三章 海篷子高亲和K~+转运体SbHKT1基因的功能鉴定及在棉花中的遗传转化 | 第71-85页 |
| 1 材料与方法 | 第71-72页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| 2 仪器设备与酶、试剂 | 第72页 |
| ·仪器、酶、培养基及常用试剂的配置 | 第72页 |
| ·实验用的引物 | 第72页 |
| 3 实验方法 | 第72-77页 |
| ·植物表达载体对烟草的转化 | 第72页 |
| ·农杆菌菌液的活化 | 第72页 |
| ·叶盘化法侵染烟草 | 第72页 |
| ·转基因烟草PCR及RT-PCR检测 | 第72页 |
| ·植物表达载体对棉花的转化 | 第72-73页 |
| ·培养基 | 第72-73页 |
| ·农杆菌培养基 | 第72-73页 |
| ·棉花组培培养基 | 第73页 |
| ·Southern杂交分析 | 第73-77页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第73-74页 |
| ·试剂及其配制 | 第74-75页 |
| ·基因组DNA的酶切 | 第75-76页 |
| ·地高辛标记探针 | 第76页 |
| ·转膜 | 第76页 |
| ·杂交与洗膜 | 第76-77页 |
| 4 结果与分析 | 第77-83页 |
| ·转基因烟草抗性苗的获得和检测 | 第77-80页 |
| ·转基因烟草抗性植株的PCR检测 | 第77-78页 |
| ·转基因烟草阳性植株的RT-PCR检测 | 第78-79页 |
| ·转SbHKT1基因烟草的耐盐性鉴定 | 第79-80页 |
| ·SbHKT1基因在棉花中的遗传转化研究 | 第80-83页 |
| ·转基因棉花抗性植株的PCR检测 | 第80-81页 |
| ·转基因棉花阳性植株的RT-PCR检测 | 第81-82页 |
| ·Southern杂交分析转基因棉花植株 | 第82-83页 |
| 5 讨论 | 第83-85页 |
| 全文结论与创新点 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 附录 | 第97-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文及研究成果 | 第103页 |
