| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 专有名词及缩写词说明 | 第8-9页 |
| 1. 引言 | 第9-19页 |
| ·腺苷酸合成酶超基因家族及其成员介绍 | 第9-15页 |
| ·腺苷酸超基因家族 | 第9-10页 |
| ·荧光素酶 | 第10-12页 |
| ·4-香豆酸辅酶A连接酶基因家族介绍 | 第12-14页 |
| ·乙酰辅酶A连接酶 | 第14-15页 |
| ·乙酰辅酶A连接酶功能介绍及研究现状 | 第15-16页 |
| ·本实验室对于4CL及ACS基因的研究情况 | 第16-17页 |
| ·研究意义 | 第17-19页 |
| 2. 三个腺苷酸合成酶超基因家族成员的克隆与蛋白纯化 | 第19-43页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·实验仪器与主要设备 | 第19页 |
| ·药品与试剂 | 第19-20页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3的基因克隆 | 第20-22页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3的引物设计及PCR扩增 | 第20-21页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3基因的鉴定 | 第21-22页 |
| ·PCR产物的回收 | 第21页 |
| ·PCR产物与pMD18-T载体的链接 | 第21-22页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3基因序列分析 | 第22页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第22-25页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·ACS-1、ACS-2、ACS-3质粒及pET30a载体的双酶切 | 第22-23页 |
| ·目的片段与pET30a载体的连接 | 第23页 |
| ·连接产物的鉴定 | 第23页 |
| ·重组蛋白的纯化与表达 | 第23-24页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第23-24页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第24页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第24页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第24-25页 |
| ·蛋白质含量标准曲线的测定 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-43页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3的引物设计及PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3的PCR产物测序结果 | 第26-29页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3的基因序列分析 | 第29-37页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3基因的BLAST结果分析 | 第29-32页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3基因的进化分析 | 第32页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3基因的保守区域及底物结合区域分析 | 第32-37页 |
| ·蛋白纯化结果 | 第37-43页 |
| ·ACS-1、ACS-2及ACS-3的表达载体构建 | 第37-39页 |
| ·ACS-2及ACS-3重组蛋白的分离与纯化 | 第39-43页 |
| 3. 酶学性质研究 | 第43-51页 |
| ·药品与试剂 | 第43页 |
| ·酶学活性的确定 | 第43-44页 |
| ·4-香豆酸辅酶A连接酶活性的检测 | 第43-44页 |
| ·乙酰辅酶A连接酶活性的检测 | 第44页 |
| ·最适反应条件的确定 | 第44页 |
| ·最适反应温度的确定 | 第44页 |
| ·最适反应pH的确定 | 第44页 |
| ·Km值及Vm值的测定 | 第44-45页 |
| ·实验结果与分析 | 第45-51页 |
| ·酶学活性的确定 | 第45页 |
| ·4-香豆酸辅酶A连接酶活性的检测 | 第45页 |
| ·乙酰辅酶A连接活性的检测 | 第45页 |
| ·最适反应条件的确定 | 第45-47页 |
| ·最适反应温度的确定 | 第45-46页 |
| ·最适反应pH值的确定 | 第46-47页 |
| ·Km值及Vm值的测定 | 第47-51页 |
| 4. 结果与分析 | 第51-55页 |
| 5. 展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 作者简介 | 第63-65页 |
| 导师简介 | 第65-67页 |
| 获得成果目录 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
