| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-39页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-39页 |
| 第一节 副溶血弧菌的生物学特性及其主要毒力因子 | 第17-27页 |
| 1. 副溶血弧菌概述 | 第17页 |
| 2. 副溶血弧菌致病力 | 第17-18页 |
| 3. 副溶血弧菌的毒力因子与致病机理 | 第18-25页 |
| ·溶血素 | 第18-20页 |
| ·Ⅲ型分泌系统 | 第20-23页 |
| ·粘附相关因子 | 第23-24页 |
| ·运动与抗环境应激因子 | 第24-25页 |
| ·铁离子获取系统 | 第25页 |
| 4. 副溶血弧菌致病性的动物模型 | 第25页 |
| 5. 总结 | 第25-27页 |
| 第二节 细菌的Ⅵ型分泌系统 | 第27-39页 |
| 1. 细菌的分泌系统概述 | 第27-28页 |
| 2. Ⅵ型分泌系统的结构 | 第28-31页 |
| ·结构蛋白 | 第28页 |
| ·转位蛋白 | 第28-30页 |
| ·分泌蛋白 | 第30-31页 |
| 3. Ⅵ型分泌系统的功能 | 第31-33页 |
| ·增强细菌对宿主细胞的致病力 | 第31-32页 |
| ·降低细菌对宿主细胞的致病力 | 第32-33页 |
| ·增强细菌对外界环境的适应性 | 第33页 |
| 4. Ⅵ型分泌系统的调控 | 第33-37页 |
| ·元调控系统 | 第33-34页 |
| ·氨酸/苏氨酸磷酸化系统 | 第34-35页 |
| ·σ~(54)调节因子 | 第35页 |
| ·组氨酸样蛋白 | 第35页 |
| ·AraC-,TetR-和MarR-样转录调节因子 | 第35页 |
| ·Fur | 第35-37页 |
| 5. 副溶血弧菌中Ⅵ型分泌系统研究进展 | 第37-39页 |
| 第二部分 试验研究 | 第39-125页 |
| 第二章 副溶血弧菌分离株的生物学特性与毒力因子分析 | 第41-63页 |
| 第一节 副溶血弧菌分离株的生物学特性和主要毒力因子分布 | 第41-54页 |
| 摘要 | 第41-42页 |
| 1. 材料与方法 | 第42-46页 |
| ·菌株及培养 | 第42页 |
| ·基因组DNA制备 | 第42页 |
| ·主要毒力因子PCR检测 | 第42-45页 |
| ·神奈川溶血试验 | 第45页 |
| ·尿素酶试验 | 第45页 |
| ·细胞毒性试验 | 第45-46页 |
| 2. 结果 | 第46-49页 |
| ·副溶血弧菌主要毒力因子分布 | 第46-47页 |
| ·溶血性 | 第47页 |
| ·尿素酶活性 | 第47-48页 |
| ·T3SS2阳性副溶血弧菌分离中株结构蛋白、转位蛋白与分泌蛋白的检测 | 第48-49页 |
| ·T3SS2阳性副溶血弧菌分离株的细胞毒性分析 | 第49页 |
| 3. 讨论 | 第49-54页 |
| 第二节 副溶血弧菌Ⅵ型分泌系统结构预测及其在分离株中的分布 | 第54-63页 |
| 摘要 | 第54-55页 |
| 1. 材料与方法 | 第55-56页 |
| ·菌株及培养 | 第55页 |
| ·生物信息学分析 | 第55页 |
| ·基因组DNA制备 | 第55页 |
| ·T6SS主要结构和转位蛋白基因的PCR检测 | 第55-56页 |
| 2 结果 | 第56-60页 |
| ·T6SS的结构与功能预测 | 第56-59页 |
| ·T6SS在副溶血弧菌中的分布 | 第59-60页 |
| 3. 讨论 | 第60-63页 |
| 第三章 副溶血弧菌Ⅵ型分泌系统的生物学功能 | 第63-115页 |
| 第一节 副溶血弧菌T6SS的蛋白转位功能分析 | 第63-86页 |
| 摘要 | 第63页 |
| 1. 材料与方法 | 第63-76页 |
| ·菌株及培养 | 第63-64页 |
| ·质粒的提取 | 第64-65页 |
| ·基因组DNA制备 | 第65页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第65页 |
| ·Hcp1和Hcp2多克隆抗体制备 | 第65-68页 |
| ·T6SS相关基因缺失株构建 | 第68-72页 |
| ·互补质粒的构建 | 第72-73页 |
| ·细菌菌体和上清蛋白样品的制备 | 第73页 |
| ·SDS-PAGE和免疫印迹 | 第73-74页 |
| ·荧光定量检测icmF1,icmF2,hcp1和hcp2的转录水平 | 第74-76页 |
| 2 结果 | 第76-84页 |
| ·Hcp1和Hcp2多克隆抗体效价 | 第76-77页 |
| ·T6SS相关基因缺失株鉴定 | 第77-80页 |
| ·T6SS相关基因互补质粒鉴定 | 第80-81页 |
| ·副溶血弧菌T6SS转位蛋白Hcp1和Hcp2表达和转位分析 | 第81-84页 |
| 3 讨论 | 第84-86页 |
| 第二节 副溶血弧菌T6SS的生物学功能分析 | 第86-115页 |
| 摘要 | 第86页 |
| 1. 材料与方法 | 第86-92页 |
| ·菌株及培养 | 第86页 |
| ·多基因缺失株构建 | 第86页 |
| ·互补菌株构建 | 第86-87页 |
| ·生长试验 | 第87页 |
| ·抗酸应激试验 | 第87-88页 |
| ·生物被膜试验 | 第88页 |
| ·细胞毒性试验 | 第88-89页 |
| ·细胞黏附试验 | 第89页 |
| ·细胞自噬试验 | 第89-90页 |
| ·细胞凋亡试验 | 第90页 |
| ·红细胞溶血试验 | 第90-91页 |
| ·Hcp2和VgrG2的真核表达 | 第91-92页 |
| ·VgrG2的原核表达 | 第92页 |
| 2. 结果 | 第92-112页 |
| ·多基因缺失突变株的鉴定 | 第92-97页 |
| ·互补菌株的鉴定 | 第97-98页 |
| ·T6SS不影响副溶血弧菌的体外生长特性 | 第98页 |
| ·T6SS不介导抗酸应激的能力 | 第98-100页 |
| ·T6SS不参与副溶血弧菌的生物被膜形成 | 第100页 |
| ·T6SS参与细菌对上皮细胞的黏附 | 第100-104页 |
| ·T6SS不参与细菌对上皮细胞的细胞毒性 | 第104页 |
| ·T6SS2促进副溶血弧菌对RAW264.7细胞的自噬 | 第104-111页 |
| ·T6SS不参与副溶血弧菌对巨噬细胞的细胞凋亡 | 第111页 |
| ·T6SS不介导对红细胞溶血 | 第111-112页 |
| 3. 讨论 | 第112-115页 |
| 第四章 副溶血弧菌二元调控因子VPA1045和VPA1049对T6SS2的调控 | 第115-125页 |
| 摘要 | 第115页 |
| 1 材料与方法 | 第115-117页 |
| ·菌株及培养 | 第115-116页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第116页 |
| ·质粒提取 | 第116页 |
| ·Vpa1045和Vpa1049基因缺失株构建 | 第116页 |
| ·生长试验 | 第116页 |
| ·细菌菌体和上清蛋白样品的制备 | 第116页 |
| ·SDS-PAGE 和 Western Blot | 第116页 |
| ·焚光定量检测hcp2的转录水平 | 第116-117页 |
| ·细胞點附实验 | 第117页 |
| 2. 结果 | 第117-122页 |
| ·VPA1045和VPA1049的结构与功能预测 | 第117-118页 |
| ·VPA1045和VPA1049的基因缺失 | 第118-119页 |
| ·VPA1045和VPA1049不影响副溶血弧菌的生长 | 第119页 |
| ·VPA1045和VPA1049不影响hcp2的转录水平 | 第119-120页 |
| ·VPA1045和VPA1049均上调Hcp2的转位量,但不影响表达量 | 第120-122页 |
| ·VPA1045和VPA1049参与T6SS2介导的对HeLa细胞黏附 | 第122页 |
| 3. 讨论 | 第122-125页 |
| 结论 | 第125-127页 |
| 创新性 | 第127-129页 |
| 参考文献 | 第129-139页 |
| 作者简介 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141-142页 |
