| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-19页 |
| 第一部分 Sonic hedgehog 对 VSMC 迁移和自噬的调控作用和机理研究 | 第19-142页 |
| 第一章 前言 | 第19-48页 |
| 第一节 VSMC 与心血管疾病 | 第20-36页 |
| ·VSMC 的表型与心血管疾病 | 第20-23页 |
| ·VSMC 的迁移、浸润与心血管疾病 | 第23-30页 |
| ·VSMC 的自噬与心血管疾病 | 第30-36页 |
| 第二节 Sonic Hedgehog 信号通路与心血管疾病 | 第36-45页 |
| ·Sonic Hedgehog 信号通路 | 第36-39页 |
| ·Sonic Hedgehog 信号通路与其它信号通路的相互作用 | 第39-40页 |
| ·Sonic Hedgehog 信号通路在心血管发育中的作用 | 第40-41页 |
| ·Sonic Hedgehog 信号通路在心血管疾病中的作用 | 第41-42页 |
| ·Sonic Hedgehog 信号通路在 VSMC 中的研究现状 | 第42-43页 |
| ·靶向 Shh 信号通路的心血管疾病治疗策略 | 第43-45页 |
| 第三节 本课题研究的目的和意义 | 第45-46页 |
| 第四节 科研假设与实验设计 | 第46-48页 |
| 第二章 材料与方法 | 第48-77页 |
| 第一节 主要实验仪器、材料及试剂 | 第48-59页 |
| ·主要实验仪器 | 第48页 |
| ·实验动物、细胞系、菌株和载体 | 第48-49页 |
| ·主要实验材料 | 第49-53页 |
| ·主要实验溶液配方 | 第53-59页 |
| 第二节 实验方法 | 第59-77页 |
| ·细胞培养 | 第59页 |
| ·构建 mShh 真核表达质粒 pcDNA4/TO/myc-His A-mShh | 第59-62页 |
| ·HASMC-mix-TR-mshh 表达系统的稳定细胞系的建立 | 第62-64页 |
| ·实时定量 PCR 检测目的基因的表达 | 第64-69页 |
| ·蛋白印迹（Western Blotting） | 第69-70页 |
| ·WST-1 法检测细胞增殖试验 | 第70页 |
| ·流式细胞分析 | 第70-71页 |
| ·细胞爬片免疫荧光 | 第71-72页 |
| ·透射电子显微镜检测自噬小体 | 第72页 |
| ·C57BL/6J 小鼠颈动脉结扎模型和 H&E 染色 | 第72-74页 |
| ·细胞迁移和细胞浸润 | 第74-75页 |
| ·明胶酶谱法 | 第75-76页 |
| ·ATG7 siRNA 转染 | 第76页 |
| ·统计学分析 | 第76-77页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第77-132页 |
| 第一节 小鼠新生内膜模型中 Shh 的表达上调 | 第77-78页 |
| 第二节 HASMC-mix-TR-mshh 诱导表达细胞系的建立 | 第78-83页 |
| ·表达载体的构建 | 第78-79页 |
| ·表达载体在哺乳动物细胞中正常诱导表达有活性 Shh | 第79-81页 |
| ·稳定细胞系的建立 | 第81-82页 |
| ·小结 | 第82-83页 |
| 第三节 Shh 抑制 VSMC 的分化 | 第83-90页 |
| ·Shh 抑制 TGF-β1 对 VSMC 分化的诱导 | 第83-86页 |
| ·Shh 削弱 TGF-β1 对 VSMC 增殖的抑制作用 | 第86-88页 |
| ·Shh 促进 VSMC 中合成表型标志物 OPN 的表达 | 第88页 |
| ·小结 | 第88-90页 |
| 第四节 Shh 促进 VSMC 的迁移和浸润 | 第90-106页 |
| ·Shh 促进 VSMC 中基质金属蛋白酶 MMP-2 和 MMP-9 的表达和活性 | 第90-96页 |
| ·Shh 促进 VSMC 的迁移 | 第96-103页 |
| ·Shh 促进 VSMC 的浸润 | 第103-104页 |
| ·小结 | 第104-106页 |
| 第五节 Shh 促进 VSMC 的自噬 | 第106-132页 |
| ·Shh 促进 VSMC 的自噬 | 第106-115页 |
| ·mTOR 通路抑制剂 rapamycin 与 Shh 协同促进自噬 | 第115-119页 |
| ·AKT 通路抑制剂 AKTI IV 抑制 Shh 诱导的 VSMC 自噬 | 第119-123页 |
| ·Shh 所诱导的自噬对 VSMC 的存活具有促进作用 | 第123-131页 |
| ·小结 | 第131-132页 |
| 第四章 讨论 | 第132-140页 |
| 第一节 Shh 抑制血管平滑肌细胞的分化 | 第132-135页 |
| 第二节 Shh 促进血管平滑肌细胞的迁移与浸润 | 第135-137页 |
| 第三节 Shh 促进血管平滑肌细胞的自噬 | 第137-140页 |
| 第五章 结论 | 第140-142页 |
| 第一节 本课题的主要结论 | 第140页 |
| 第二节 主要的创新点 | 第140页 |
| 第三节 研究的前景与展望 | 第140-142页 |
| 第二部分 小鼠 SOCS3 蛋白结构的生物信息学分析和功能区预测 | 第142-152页 |
| 第一章 前言 | 第142-144页 |
| 第一节 SOCS3 蛋白概述 | 第142页 |
| 第二节 生物信息学方法概述 | 第142-143页 |
| 第三节 本研究的目的和意义 | 第143-144页 |
| 第二章 材料与方法 | 第144-146页 |
| 第一节 实验材料 | 第144页 |
| ·菌株和载体 | 第144页 |
| ·细菌培养基 | 第144页 |
| ·细胞培养试剂、酶及生化试剂 | 第144页 |
| 第二节 实验方法 | 第144-146页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第144页 |
| ·对 SOCS3 基因进行缺失的重组 PCR | 第144-145页 |
| ·FITC 标记抗体及流式细胞仪分析 | 第145页 |
| ·生物信息学方法 | 第145-146页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第146-150页 |
| 第一节 生物信息学分析的结果 | 第146-147页 |
| ·SOCS3129-161 位有一个脯氨酸富集区 | 第146页 |
| ·脯氨酸富集区缺失前后的 SOCS3 三级结构建模和蛋白三级结构比对 | 第146-147页 |
| ·生物信息学分析的结论 | 第147页 |
| 第二节 生物学实验结果与分析 | 第147-150页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第147-148页 |
| ·FITC 标记抗体及流式细胞仪分析 | 第148-150页 |
| 第四章 讨论 | 第150-151页 |
| 第五章 结论 | 第151-152页 |
| 参考文献 | 第152-162页 |
| 致谢 | 第162-163页 |
| 个人简历 | 第163-164页 |
| Curriculum Vitae | 第164-165页 |
