农药小分子氰戊菊酯单克隆抗体制备与应用研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第7-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-22页 |
| ·前言 | 第12-13页 |
| ·氰戊菊酯概述 | 第13-17页 |
| ·氰戊菊酯的结构特征 | 第13-14页 |
| ·氰戊菊酯对人体的危害 | 第14-15页 |
| ·氰戊菊酯对动物的危害 | 第15页 |
| ·氰戊菊酯分析检测技术研究进展 | 第15-17页 |
| ·免疫分析研究进展 | 第17-18页 |
| ·人工抗原合成研究进展 | 第18-21页 |
| ·氰戊菊酸作为半抗原 | 第18页 |
| ·在芳环上引入羧基或氨基的反应 | 第18-19页 |
| ·在氰戊菊酯分子的氰基端引入连接臂作为半抗原 | 第19页 |
| ·以氰戊菊酯农药水解后醇的衍生物作为半抗原 | 第19页 |
| ·半抗原与载体的连接方法 | 第19-20页 |
| ·载体蛋白的选择 | 第20页 |
| ·偶联臂的选择 | 第20-21页 |
| ·本研究内容及意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第22-40页 |
| ·材料 | 第22-26页 |
| ·实验动物与SP2/O骨髓瘤细胞 | 第22页 |
| ·主要试剂药品 | 第22页 |
| ·仪器 | 第22-23页 |
| ·SDS-PAGE所需试剂 | 第23-24页 |
| ·酶联免疫吸附测定(ELISA)所需溶液 | 第24-25页 |
| ·细胞融合与培养所需溶液 | 第25页 |
| ·其他溶液 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-28页 |
| ·氰戊菊酯半抗原的合成 | 第26-27页 |
| ·氰戊菊酯半抗原的鉴定 | 第27页 |
| ·氰戊菊酯人工抗原合成及鉴定 | 第27-28页 |
| ·小鼠免疫 | 第28-30页 |
| ·免疫原的乳化 | 第28页 |
| ·免疫方案 | 第28-29页 |
| ·间接非竞争法测抗血清效价 | 第29-30页 |
| ·间接竞争法测抗血清灵敏度 | 第30页 |
| ·单克隆抗体的制备与鉴定 | 第30-34页 |
| ·小鼠SP2/O骨髓瘤的准备 | 第30页 |
| ·细胞融合的准备 | 第30-31页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第31-33页 |
| ·SP2/O实体瘤的制备 | 第33页 |
| ·免疫睥细胞的制备 | 第33页 |
| ·细胞融合 | 第33-34页 |
| ·阳性孔的筛选 | 第34-36页 |
| ·集落孔的观察 | 第34-35页 |
| ·筛选方法的建立 | 第35页 |
| ·间接非竞争ELISA法的建立 | 第35页 |
| ·间接竞争ELISA法的建立 | 第35-36页 |
| ·细胞冻存与复苏 | 第36-37页 |
| ·细胞冻存 | 第36页 |
| ·细胞复苏 | 第36-37页 |
| ·腹水的制备与纯化 | 第37-38页 |
| ·腹水的制备 | 第37页 |
| ·腹水纯化(辛酸硫酸铵法) | 第37-38页 |
| ·纯化后抗体性质鉴定 | 第38-39页 |
| ·纯化后抗体与腹水抗体效价的测定 | 第38页 |
| ·纯化后抗体与腹水SDS-PAGE鉴定 | 第38页 |
| ·抗体灵敏度测定 | 第38页 |
| ·抗体特异性测定 | 第38-39页 |
| ·氰戊菊酯ELISA检测方法的建立 | 第39-40页 |
| ·棋盘法确定包被原和抗体工作浓度的选择 | 第39页 |
| ·ELISA检测方法的建立 | 第39-40页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第40-52页 |
| ·氰戊菊酯半抗原的鉴定 | 第40-42页 |
| ·核磁共振鉴定分析 | 第40页 |
| ·半抗原质谱鉴定分析 | 第40-42页 |
| ·人工抗原鉴定 | 第42-43页 |
| ·紫外扫描光谱分析 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE电泳鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·抗血清测定结果 | 第43-44页 |
| ·细胞融合结果 | 第44-46页 |
| ·阳性细胞的筛选 | 第46-47页 |
| ·抗体特性鉴定 | 第47-50页 |
| ·SDS-PAGE电泳鉴定腹水纯化效果 | 第47-48页 |
| ·纯化后抗体与腹水抗体蛋白含量及效价的测定 | 第48页 |
| ·抗体特异性测定结果 | 第48-49页 |
| ·抗体灵敏度测定结果 | 第49-50页 |
| ·氰戊菊酯标准曲线的建立 | 第50-52页 |
| ·棋盘法确定最佳抗原和抗体工作浓度 | 第50-51页 |
| ·氰戊菊酯间接竞争ELISA标准曲线的建立 | 第51-52页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第52-56页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| ·半抗原设计 | 第52-53页 |
| ·免疫剂量 | 第53页 |
| ·免疫时间 | 第53页 |
| ·细胞融合 | 第53-54页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第54-55页 |
| ·展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
