| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 1 前言 | 第10-25页 |
| ·极地微生物与低温酶 | 第10-14页 |
| ·极地微生物的分类 | 第11页 |
| ·极地微生物的适冷机制 | 第11-12页 |
| ·低温酶的化学反应特征 | 第12-13页 |
| ·低温酶的分子结构假说 | 第13-14页 |
| ·低温脂肪酶 | 第14-24页 |
| ·脂肪酶简介 | 第14-15页 |
| ·低温脂肪酶来源及克隆 | 第15-17页 |
| ·低温脂肪酶的异源表达 | 第17-23页 |
| ·低温脂肪酶的应用 | 第23-24页 |
| ·本课题的研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 Psychrobacter sp. G 基因组DNA 质粒文库的构建与低温脂肪酶基因的克隆 | 第25-40页 |
| ·材料与方法 | 第25-29页 |
| ·菌株与试剂 | 第25页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第25-26页 |
| ·基因组DNA 酶切 | 第26-27页 |
| ·基因组DNA 片段与pUC118 HincⅡ/BAP 载体连接 | 第27页 |
| ·连接产物转化 | 第27-28页 |
| ·菌落PCR 检测和测序验证 | 第28页 |
| ·产低温脂肪酶阳性克隆的筛选 | 第28页 |
| ·产低温脂肪酶基因序列分析 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-37页 |
| ·基因组DNA 电泳检测 | 第29页 |
| ·菌落PCR 检测和测序验证 | 第29-30页 |
| ·南极适冷菌Psychrobacter sp. G 低温脂肪酶基因的序列分析 | 第30-36页 |
| ·低温脂肪酶的3D 结构预测 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 3 异源表达载体的筛选及分子伴侣共表达 | 第40-65页 |
| ·材料与方法 | 第40-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第40-41页 |
| ·重组质粒构建相关试剂 | 第41页 |
| ·核酸电泳相关试剂 | 第41-42页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳相关试剂 | 第42页 |
| ·Western blot 相关试剂 | 第42-43页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第43-46页 |
| ·重组菌的诱导表达及异源表达载体的筛选 | 第46页 |
| ·重组菌的诱导表达及最佳诱导条件的探索 | 第46-47页 |
| ·脂肪酶酶活检测及蛋白浓度测定 | 第47-48页 |
| ·SDS-PAGE 检测蛋白表达 | 第48-49页 |
| ·分子伴侣共表达 | 第49-50页 |
| ·Western blot 检测 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-61页 |
| ·产低温脂肪酶重组菌的构建 | 第51-52页 |
| ·低温脂肪酶基因Lip-1452 克隆到pColdⅢ载体中的表达 | 第52-53页 |
| ·低温脂肪酶基因Lip-948 在pColdⅢ载体中的表达 | 第53-54页 |
| ·低温脂肪酶基因Lip-948 在pColdⅠ载体中的表达 | 第54页 |
| ·低温脂肪酶基因Lip-948 在pMAL-c4x 载体中的表达 | 第54-55页 |
| ·低温脂肪酶基因Lip-948 在pET32a 载体中的表达 | 第55-56页 |
| ·最佳诱导表达条件探索 | 第56-59页 |
| ·分子伴侣共表达 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·小结 | 第63-65页 |
| 4 低温脂肪酶LIP-948 的分离纯化与酶学性质研究 | 第65-74页 |
| ·材料与方法 | 第65-67页 |
| ·菌株和试剂 | 第65页 |
| ·重组脂肪酶的纯化 | 第65-66页 |
| ·重组脂肪酶酶学性质 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-71页 |
| ·低温脂肪酶pColdⅠ+Lip-948 的纯化 | 第67-68页 |
| ·温度对酶活的影响 | 第68-69页 |
| ·pH 对酶活的影响 | 第69-70页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第70页 |
| ·底物特异性 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 5 总结与展望 | 第74-77页 |
| ·总结 | 第74-75页 |
| ·展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 硕士期间发表文章 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
