谷氨酸脱羧酶转化制备γ-氨基丁酸工艺的研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-22页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·y-氨基丁酸的结构和性质 | 第15-16页 |
| ·氨基丁酸的生理功能及其应用 | 第16-17页 |
| ·功能性食品和医药中间体 | 第16页 |
| ·食品的添加剂 | 第16页 |
| ·保健原料 | 第16页 |
| ·饲料的添加剂 | 第16-17页 |
| ·对农作物影响 | 第17页 |
| ·y-氨基丁酸的测定方法 | 第17-18页 |
| ·Berthelot比色法 | 第17页 |
| ·纸层析法 | 第17页 |
| ·高效液相色谱法 | 第17-18页 |
| ·毛细管电泳-电化学法 | 第18页 |
| ·其它方法 | 第18页 |
| ·γ-氨基丁酸制备方法 | 第18-20页 |
| ·化学合成法 | 第18页 |
| ·植物富集法 | 第18页 |
| ·微生物发酵法 | 第18-19页 |
| ·酶法合成 | 第19-20页 |
| ·其它方法 | 第20页 |
| ·Y-氨基丁酸的提取方法 | 第20页 |
| ·论文选题背景及主要研究内容 | 第20-22页 |
| 第2章 重组谷氨酸脱羧酶工程菌的构建 | 第22-31页 |
| ·前言 | 第22页 |
| ·材料与设备 | 第22-23页 |
| ·菌种 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要设备 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-26页 |
| ·谷氨酸脱羧酶基因的克隆 | 第23-24页 |
| ·平板培养 | 第23页 |
| ·液体培养 | 第23页 |
| ·基因组DNA的获取 | 第23-24页 |
| ·谷氨酸脱羧酶基因的扩增 | 第24-25页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·目的片段获得 | 第24页 |
| ·谷氨酸脱羧酶基因表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·核苷酸序列的测定 | 第25页 |
| ·菌体的诱导表达 | 第25页 |
| ·酶活的初步测定 | 第25-26页 |
| ·比色法测定γ-氨基丁酸含量标准曲线的确立 | 第26页 |
| ·配制GABA系列标准储备液 | 第26页 |
| ·GABA系列标准溶液的测定 | 第26页 |
| ·实验结果 | 第26-29页 |
| ·谷氨酸脱羧酶基因的扩增结果 | 第26-27页 |
| ·目的片段检测结果 | 第26-27页 |
| ·谷氧酸脱錢酶基因表达载体的构建结果 | 第27页 |
| ·核苷酸序列的测定结果 | 第27-28页 |
| ·y-氨基丁酸含量的标准曲线 | 第28-29页 |
| ·本章小结 | 第29-31页 |
| 第3章 工程菌产酶制备GABA测定条件的优化 | 第31-38页 |
| ·前言 | 第31页 |
| ·材料与设备 | 第31-32页 |
| ·菌种 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·主要药品 | 第31页 |
| ·主要设备 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-33页 |
| ·比色法测定GABA波长的选择 | 第32页 |
| ·正交法测定各因素对Betrhelot反应的影响 | 第32页 |
| ·工作曲线的建立 | 第32-33页 |
| ·精密度和回收率 | 第33页 |
| ·大肠杆菌工程菌谷氨酸脱接酶液的制备 | 第33页 |
| ·样品溶液的测定 | 第33页 |
| ·氨基酸分析仪测定 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-36页 |
| ·测定波长的选择 | 第33-34页 |
| ·各因素具体参数、水平及分析结果 | 第34-35页 |
| ·GABA标准曲线的建立 | 第35-36页 |
| ·精密度和回收率 | 第36页 |
| ·比色法与氨基酸自动分析仪法测定结果比较 | 第36页 |
| ·本章小结 | 第36-38页 |
| 第4章 重组谷氨酸脱羧酶发酵条件的优化 | 第38-51页 |
| ·前言 | 第38页 |
| ·材料与仪器 | 第38-39页 |
| ·菌株 | 第38页 |
| ·仪器 | 第38页 |
| ·药品 | 第38-39页 |
| ·培养基及培养条件 | 第39页 |
| ·方法 | 第39页 |
| ·酶活分析 | 第39页 |
| ·实验设计 | 第39-40页 |
| ·单因素实验 | 第39页 |
| ·响应面实验 | 第39-40页 |
| ·不同诱导时间酶活与蛋白质表达量的关系 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-50页 |
| ·诱导条件的优化 | 第40-43页 |
| ·菌株的生长曲线 | 第40-41页 |
| ·诱导剂的添加时间对GAD酶活的影响 | 第41页 |
| ·诱导剂的浓度对GAD酶活的影响 | 第41-42页 |
| ·诱导时间对GAD酶活的影响 | 第42页 |
| ·诱导温度对GAD酶活的影响 | 第42-43页 |
| ·培养条件的优化 | 第43-49页 |
| ·筛选出的显著因素 | 第43-44页 |
| ·最陡寻优实验及正交设计表 | 第44-45页 |
| ·结果分析及响应面图 | 第45-49页 |
| ·酶活测定结果及蛋白质电泳图 | 第49-50页 |
| ·酶活测定结果 | 第49页 |
| ·蛋白质电泳图 | 第49-50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 第5章 响应面法优化谷氨酸脱羧酶转化条件 | 第51-65页 |
| ·前言 | 第51页 |
| ·材料与方法 | 第51-52页 |
| ·材料与仪器 | 第51页 |
| ·培养基及培养条件 | 第51-52页 |
| ·酶活分析及摩尔转化率的计算 | 第52页 |
| ·实验设计 | 第52-54页 |
| ·单因素实验 | 第52-53页 |
| ·转化缓冲液种类的确定 | 第52页 |
| ·转化底物浓度的确定 | 第52-53页 |
| ·缓冲液pH值的确定 | 第53页 |
| ·PLP的添加量对GABA产量的影响 | 第53页 |
| ·酶转化时间的确定 | 第53页 |
| ·酶转化温度的确定 | 第53页 |
| ·加酶量(菌体浓度)的确定 | 第53页 |
| ·各个最适条件最大酶活与摩尔转化率对应关系 | 第53页 |
| ·响应面实验 | 第53-54页 |
| ·BsCi细胞转化生产能力的测试 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-64页 |
| ·单因素实验结果 | 第54-58页 |
| ·转化缓冲液种类的确定 | 第54-55页 |
| ·转化底物浓度的确定 | 第55页 |
| ·缓冲液pH值的确定 | 第55-56页 |
| ·PLP的添加量对GABA产量的影响 | 第56页 |
| ·酶转化时间的确定 | 第56页 |
| ·酶转化温度的确定 | 第56-57页 |
| ·加酶量(菌体浓度)的确定 | 第57页 |
| ·各个最适条件最大酶活与摩尔转化率对应关系 | 第57-58页 |
| ·响应面实验结果 | 第58-64页 |
| ·Plackett-Burman设计结果 | 第58-59页 |
| ·响应面分析法优化酶转化的条件 | 第59-64页 |
| ·B_3C_1细胞转化生产能力的测试结果 | 第64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 第6章 γ-氨基丁酸的分离与纯化初探 | 第65-70页 |
| ·前言 | 第65页 |
| ·材料与仪器 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-67页 |
| ·样品 | 第65页 |
| ·脱色方法 | 第65页 |
| ·浓缩方法 | 第65-66页 |
| ·结晶方法 | 第66页 |
| ·脱色率、收率、结晶率的计算方法 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-69页 |
| ·脱色结果 | 第67-68页 |
| ·浓缩结果 | 第68页 |
| ·结晶结果 | 第68-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 第7章 结论与展望 | 第70-72页 |
| ·结论 | 第70-71页 |
| ·展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 本人在攻读硕士学位期间发表旳学术论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
