| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·芽孢杆菌表达系统 | 第8-11页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第8-9页 |
| ·其他芽孢杆菌表达系统 | 第9-10页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌及其遗传工程 | 第10-11页 |
| ·细菌普鲁兰酶及其编码基因 | 第11-12页 |
| ·本课题研究内容和意义 | 第12-14页 |
| 第二章 材料和方法 | 第14-24页 |
| ·材料 | 第14-16页 |
| ·菌株与质粒 | 第14页 |
| ·质粒提取与纯化试剂 | 第14页 |
| ·工具酶与主要生化试剂 | 第14-15页 |
| ·培养基与培养条件 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15-16页 |
| ·方法 | 第16-24页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第16页 |
| ·普鲁兰酶基因的PCR 扩增 | 第16-17页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第17页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第17页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞转化 | 第17页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌染色体DNA 的提取 | 第17-18页 |
| ·载体构建引物设计 | 第18-19页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态的制备及转化 | 第19-20页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌的电转化 | 第20页 |
| ·枯草芽孢杆菌与解淀粉芽孢杆菌质粒的大量提取 | 第20页 |
| ·重组质粒的稳定性分析 | 第20-21页 |
| ·发酵实验 | 第21页 |
| ·酶活测定方法 | 第21页 |
| ·重组普鲁兰酶的纯化 | 第21页 |
| ·重组普鲁兰酶酶学性质分析 | 第21-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-56页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌分泌表达载体pCHA03 的构建 | 第24-28页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌启动子Pamy 的PCR 扩增 | 第24页 |
| ·表达载体pCHA03 的构建 | 第24-27页 |
| ·表达载体pCHA03 | 第27-28页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌BF7658 芽孢形成关键基因spoIIAC 的敲除 | 第28-33页 |
| ·基因敲除载体的构建 | 第28-31页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌芽孢形成关键基因spoIIAC 的敲除 | 第31-33页 |
| ·重组质粒pUC980-BdP 和pCHA03-BdP 的构建 | 第33-35页 |
| ·重组质粒pCHA03-BdP 的构建 | 第33页 |
| ·重组质粒pUC980-BdP 构建 | 第33-35页 |
| ·普鲁兰酶基因在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中的表达 | 第35-39页 |
| ·普鲁兰酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第35-36页 |
| ·重组酶普鲁兰酶性质分析 | 第36-37页 |
| ·普鲁兰酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第37-39页 |
| ·普鲁兰酶在解淀粉芽孢杆菌BF7658 中的分泌表达 | 第39-43页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌BF7658/pUC980-BdP 普鲁兰酶表达情况 | 第39-41页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌BF7658/pCHA03-BdP 普鲁兰酶表达情况 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pCHA03-BdP 的稳定性分析 | 第42页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌BF7658/pCHA03-BdP 的15L 罐发酵实验 | 第42-43页 |
| ·普鲁兰酶在解淀粉芽孢杆菌sj08 中的分泌表达 | 第43-49页 |
| ·以解淀粉芽孢杆菌sj08 为宿主表达普鲁兰酶情况分析 | 第43-44页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌sj08/pCHA03-BdP 的15 L 罐发酵实验 | 第44-45页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌sj08/pCHA03-BdP 摇瓶发酵条件优化 | 第45-48页 |
| ·优化条件下解淀粉芽孢杆菌sj08/pCHA03-BdP 的15 L 罐发酵实验 | 第48-49页 |
| ·重组普鲁兰酶的纯化与酶学性质分析 | 第49-54页 |
| ·重组普鲁兰酶的纯化 | 第49-51页 |
| ·重组普鲁兰酶酶学性质分析 | 第51-54页 |
| ·不同表达系统分泌表达普鲁兰酶的比较 | 第54-56页 |
| 主要结论 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第64页 |
