| (一）PiggyBac转座子介导的基因捕获策略在斑马鱼基因研究中的应用 | 第1-77页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩写表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-24页 |
| ·斑马鱼作为模式生物的优势 | 第13-15页 |
| ·斑马鱼基因功能研究策略 | 第15-20页 |
| ·反向遗传学策略(Reverse Genetic Approaches) | 第15-18页 |
| ·正向遗传学策略(Forward Genetic Approaches) | 第18-20页 |
| ·本研究的目的,思路及意义 | 第20-24页 |
| 第二章 Helper品系转基因(转PB转座酶基因)斑马鱼的构建、筛选与分析 | 第24-51页 |
| ·实验材料、试剂及仪器 | 第24-28页 |
| ·实验动物斑马鱼及其饲养 | 第24页 |
| ·菌株,质粒 | 第24-25页 |
| ·主要实验试剂 | 第25-28页 |
| ·主要实验仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-36页 |
| ·PCR法扩增ZPC0.5(zona pellucida)启动子 | 第28-30页 |
| ·pCMV-hyPBase-IRES-EGFP表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·pZPC0.5-hyPBase-IRES-EGFP表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·显微注射及过程 | 第33-35页 |
| ·荧光观察及转基因斑马鱼的筛选 | 第35页 |
| ·Helper品系转基因斑马鱼F1代胚胎基因组DNA的提取及插入片段的PCR验证 | 第35-36页 |
| ·实验结果 | 第36-46页 |
| ·ZPC0.5启动子序列的克隆结果与功能位点分析 | 第36-37页 |
| ·pCMV-hyPBase-IRES-EGFP表达载体构建结果与验证 | 第37-39页 |
| ·pZPC0.5-hyPBase-IRES-EGFP表达载体的构建结果及验证 | 第39-41页 |
| ·外源基因(pCMV-hyPBase-IRES-EGFP)最适注射浓度的确定 | 第41-42页 |
| ·F0及F1代转基因(pCMV-hyPBase-IRES-EGFP)斑马鱼荧光性状分析 | 第42-44页 |
| ·PCR验F0及F1代转基因(pCMV-hyPBase-IRES-EGFP)斑马鱼外源基因插入 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-51页 |
| ·pCMV-hyPBase-IRES-EGFP表达载体构建的合理性及该品系转基因斑马鱼的优缺点 | 第46-47页 |
| ·斑马鱼ZPC0.5启动子选择及pZPC0.5-hyPBase-IRES-EGFP转基因斑马鱼品系的筛选 | 第47-48页 |
| ·外源基因最适注射浓度的选择 | 第48-49页 |
| ·pCMV-hyPBase-IRES-EGFP转基因斑马鱼跟对应品系斑马鱼荧光表达谱的比较与分析 | 第49-51页 |
| 第三章 Donor品系斑马鱼(携带PB转座子)的构建、筛选与分析 | 第51-66页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第51-52页 |
| ·实验动物 | 第51页 |
| ·菌株,质粒 | 第51-52页 |
| ·主要实验试剂 | 第52页 |
| ·主要实验仪器(见第二章) | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-55页 |
| ·PTK-mCherry质粒载体构建 | 第52-53页 |
| ·hyPBase mRNA体外合成模板载体pCS2+-hyPBase的构建 | 第53页 |
| ·转座酶hyPBase mRNA的制备 | 第53-54页 |
| ·微注射及过程 | 第54-55页 |
| ·荧光观察及donor品系转基因斑马鱼的筛选 | 第55页 |
| ·实验结果 | 第55-63页 |
| ·基因捕获载体质粒PTK-mCherry的构建结果 | 第55-58页 |
| ·体外合成hyPBase mRNA模板载体质粒pCS2+-hyPBase的构建结果 | 第58-59页 |
| ·PB转座酶hyPBase mRNA的体外合成结果 | 第59-60页 |
| ·基因捕获载体PTK-mCherry的最佳使用条件探索 | 第60-61页 |
| ·Donor品系转基因斑马鱼鱼筛选实验结果 | 第61-62页 |
| ·共注射hyPBase mRNA及质粒PTK-mCherry的基因捕获方法在其他品系斑马鱼中应用初探 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| ·基因捕获载体PTK-mCherry功能元件的选择及最佳使用方法研究 | 第63-64页 |
| ·F0代donor品系斑马鱼红色荧光表达谱的多样性分析 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
| (二）青岛文昌鱼six1及six4 基因的克隆及生物信息学分析 | 第77-100页 |
| 摘要 | 第77-78页 |
| ABSTRACT | 第78-79页 |
| 一、背景知识 | 第79-83页 |
| ·文昌鱼概述 | 第79-80页 |
| ·胸腺发育相关基因的研究 | 第80-82页 |
| ·Pax1,pax9与胸腺发育 | 第80-81页 |
| ·Eya1,six1,six4三基因与胸腺发育 | 第81-82页 |
| ·Foxn1与胸腺发育 | 第82页 |
| ·本研究的目的,思路及意义 | 第82-83页 |
| 二、实验材料、试剂及仪器 | 第83-84页 |
| ·实验动物 | 第83-84页 |
| ·菌株,质粒 | 第84页 |
| ·主要实验试剂 | 第84页 |
| ·主要仪器和设备 | 第84页 |
| 三、实验方法 | 第84-86页 |
| ·胸腺发育相关基因的物种进化学分析 | 第84页 |
| ·青岛文昌鱼胚胎总RNA的提取 | 第84-85页 |
| ·cDNA第一链反转及PCR扩增Amphisix1、Amphisix4 | 第85-86页 |
| 四、实验结果 | 第86-95页 |
| ·胸腺发育关键基因的进化学分析结果 | 第86-90页 |
| ·青岛文昌鱼six1和six4基因克隆结果及分析 | 第90-92页 |
| ·青岛文昌鱼six1基因的演绎蛋白分析结果 | 第92-95页 |
| 五、讨论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第101页 |
