| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-48页 |
| 1 前言 | 第15-16页 |
| 2 霉形体的研究历史 | 第16-17页 |
| 3 霉形体的细胞生物学特征 | 第17-18页 |
| ·菌落形态及培养特性 | 第17页 |
| ·细胞结构 | 第17页 |
| ·生态学特征 | 第17-18页 |
| 4 鸡毒霉形体 | 第18-19页 |
| ·鸡毒霉形体的研究历史 | 第18页 |
| ·鸡毒霉形体的生化特性及抵抗力 | 第18-19页 |
| ·鸡毒霉形体的致病力 | 第19页 |
| 5 鸡慢性呼吸道病的流行病学及发病特点 | 第19-21页 |
| ·鸡慢性呼吸道病的流行病学 | 第19-20页 |
| ·鸡慢性呼吸道病的发生特点 | 第20-21页 |
| 6 MG感染的免疫机制 | 第21-22页 |
| 7 鸡慢性呼吸道疾病的发病机理 | 第22-23页 |
| 8 鸡慢性呼吸道病的临床症状和病理变化 | 第23-24页 |
| ·鸡慢性呼吸道病的临床症状 | 第23-24页 |
| ·鸡慢性呼吸道病的病理变化 | 第24页 |
| 9 鸡毒霉形体的膜蛋白 | 第24-25页 |
| 10 鸡毒霉形体的结构蛋白 | 第25-27页 |
| 11 鸡毒霉形体黏附蛋白的研究 | 第27-32页 |
| ·鸡毒霉形体黏附蛋白的研究历史 | 第27-28页 |
| ·pMGA基因序列与功能的研究 | 第28-30页 |
| ·pMGA对MG免疫逃逸的作用 | 第30-31页 |
| ·pMGA基因的表达调控 | 第31-32页 |
| 12 鸡慢性呼吸道病防治 | 第32-34页 |
| ·疫苗免疫 | 第32-33页 |
| ·药物防治 | 第33-34页 |
| 13 微生物受体研究及应用 | 第34-43页 |
| ·微生物与受体的关系 | 第34-35页 |
| ·不同微生物会选择同一受体 | 第35页 |
| ·同一病毒可与一个以上受体结合 | 第35页 |
| ·不同科的微生物选择不同的受体,同一属的微生物选择不同的受体 | 第35-37页 |
| ·微生物与受体的相互作用启动了微生物的生命循环 | 第37-39页 |
| ·受体的研究方法 | 第39-43页 |
| 14 PMGA与宿主相互作用的研究 | 第43-44页 |
| 15 动物微生物受体的研究意义 | 第44-45页 |
| 16 生物信息学在微生物研究中的应用 | 第45-48页 |
| 研究的目的与意义 | 第48-49页 |
| 第二章 鸡毒霉形体黏附素特性鉴定 | 第49-71页 |
| 1 前言 | 第49页 |
| 2 材料与方法 | 第49-52页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-52页 |
| ·pMGA1.2的物理及化学特性分析 | 第50页 |
| ·pMGA1.2的疏水性 | 第50-51页 |
| ·pMGA1.2的亚细胞定位 | 第51页 |
| ·PMGA1.2的蛋白质卷曲螺旋分析 | 第51页 |
| ·pMGA1.2的基序(Motif)分析 | 第51页 |
| ·pMGA1.2的抗原决定簇分析 | 第51页 |
| ·pMGA1.2的低复杂区分析 | 第51页 |
| ·pMGA1.2的二级结构 | 第51页 |
| ·pMGA1.2的三级结构 | 第51-52页 |
| ·pMGA1.2的结构功能域分析 | 第52页 |
| ·pMGA1.2的序列比对 | 第52页 |
| ·pMGA1.2的保守区域分析 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-66页 |
| ·pMGA1.2的物理及化学特性 | 第52-53页 |
| ·pMGA1.2的疏水性分析 | 第53-54页 |
| ·pMGA1.2的理化性质综合分析 | 第54-55页 |
| ·pMGA1.2的亚细胞定位分析 | 第55-56页 |
| ·pMGA1.2的基序(Motif)分析 | 第56-57页 |
| ·pMGA1.2的抗原决定簇分析 | 第57页 |
| ·pMGA1.2的低复杂度区域 | 第57-58页 |
| ·pMGA1.2的二级结构 | 第58-62页 |
| ·HNN算法分析 | 第58-60页 |
| ·Chou&Fasman方法分析 | 第60-62页 |
| ·pMGA1.2的相关序列搜索结果 | 第62-64页 |
| ·pMGA1.2的蛋白超家族分析 | 第64-65页 |
| ·pMGA1.2的三级结构预测 | 第65-66页 |
| ·pMGA1.2的结构功能域分析 | 第66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| ·蛋白质的理化特性 | 第66-67页 |
| ·亚细胞定位 | 第67页 |
| ·基序分析 | 第67-68页 |
| ·pMGA1.2的抗原决定簇及疏水性分析 | 第68页 |
| ·二级结构分析 | 第68-69页 |
| ·蛋白三级结构分析 | 第69-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 第三章 鸡毒霉形体黏附素截短蛋白及全蛋白表达产物免疫学特性鉴定 | 第71-89页 |
| 1 前言 | 第71页 |
| 2 材料与方法 | 第71-76页 |
| ·试验材料 | 第71-73页 |
| ·菌种、阳性血清 | 第71-72页 |
| ·主要试剂 | 第72页 |
| ·主要试剂的配制 | 第72-73页 |
| ·试验方法 | 第73-76页 |
| ·细菌的复苏与扩大培养 | 第73-74页 |
| ·pMGA1.2及pMGA Ⅳ片段的表达 | 第74页 |
| ·培养温度和培养时间 | 第74页 |
| ·IPTG浓度 | 第74页 |
| ·培养基的pH值 | 第74页 |
| ·可溶性表达的培养时间 | 第74页 |
| ·pMGA Ⅳ及pMGA 1.2的纯化 | 第74-75页 |
| ·蛋白质的SDS-PAGE检测 | 第75页 |
| ·表达产物的Western-blot检测 | 第75-76页 |
| ·蛋白浓度的确定 | 第76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-85页 |
| ·诱导温度和诱导时间对pMGA 1.2及pMGAⅣ表达量的影响 | 第76-80页 |
| ·培养基pH值对pMGA 1.2及pMGAⅣ表达量的影响 | 第80-81页 |
| ·诱导时间对pMGA1.2及pMGAⅣ可溶性表达量的影响 | 第81-83页 |
| ·IPTG浓度对pMGA1.2及pMGAⅣ可溶性表达量的影响 | 第83-84页 |
| ·pMGA1.2及pMGAⅣ融合蛋白的纯化及免疫原性分析 | 第84-85页 |
| ·蛋白浓度 | 第85页 |
| 4 讨论 | 第85-88页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第85-86页 |
| ·诱导温度对pMGA1.2及pMGAⅣ融合蛋白表达量的影响 | 第86页 |
| ·培养基pH值及诱导时间对pMGA1.2及pMGAⅣ蛋白表达量的影响 | 第86-87页 |
| ·诱导时间对pMGA1.2及pMGAⅣ融合蛋白表达量的影响 | 第87页 |
| ·IPTG浓度对pMGA1.2及pMGAⅣ表达量的影响 | 第87-88页 |
| 5 结论 | 第88-89页 |
| 第四章 免疫荧光检测PMGA受体在鸡胚组织中的分布 | 第89-102页 |
| 1 前言 | 第89-90页 |
| 2 材料与方法 | 第90-93页 |
| ·试验材料 | 第90-91页 |
| ·主要试剂 | 第90页 |
| ·主要试剂及配制 | 第90页 |
| ·主要仪器设备 | 第90-91页 |
| ·试验方法 | 第91-93页 |
| ·融合蛋白pMGA1.2切割及免疫活性检测 | 第91页 |
| ·组织包埋 | 第91页 |
| ·间接免疫荧光试验最佳条件的确定 | 第91-92页 |
| ·间接免疫荧光的步骤 | 第92页 |
| ·特异性实验 | 第92-93页 |
| ·重复性实验 | 第93页 |
| ·免疫组化结果的判定 | 第93页 |
| 3 结果与分析 | 第93-97页 |
| ·pMGA1.2的SDS-PAGE分析 | 第93页 |
| ·免疫学活性分析 | 第93-94页 |
| ·间接免疫荧光检测鸡胚组织中pMGA受体方法的建立及优化 | 第94-97页 |
| 4 讨论 | 第97-100页 |
| 5 结论 | 第100-102页 |
| 第五章 鸡胚组织膜蛋白与鸡毒霉形体黏附素特异结合的研究 | 第102-117页 |
| 1 前言 | 第102-103页 |
| 2 材料与方法 | 第103-108页 |
| ·主要试剂 | 第103页 |
| ·主要溶液的配制 | 第103-105页 |
| ·匀浆缓冲液及膜蛋白提取缓冲液 | 第103页 |
| ·ELISA及Dot-ELISA检测所用溶液的配制 | 第103-104页 |
| ·非变性凝胶电泳(PAGE)所需溶液 | 第104页 |
| ·复性相关缓冲液 | 第104页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第104-105页 |
| ·不同组织膜蛋白的提取 | 第105-108页 |
| ·组织膜蛋白的提取方法 | 第105页 |
| ·几种表面活性剂对气管膜蛋白溶解能力的影响 | 第105页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第105页 |
| ·SDS-PAGE及转印结合实验 | 第105页 |
| ·复性处理后的western-blot | 第105-106页 |
| ·Dot-ELISA方法及结果判定 | 第106页 |
| ·最佳反应条件的选择 | 第106-107页 |
| ·特异性试验 | 第107页 |
| ·重复性试验 | 第107页 |
| ·pMGA与细胞膜结合的饱和试验 | 第107-108页 |
| 3 结果与分析 | 第108-114页 |
| ·4种表面活性剂对鸡胚气管膜蛋白的溶解 | 第108页 |
| ·细胞膜的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第108页 |
| ·10种组织膜蛋白的SDS-PAGE及Western-blot鉴定 | 第108-110页 |
| ·复性后的Western-blot | 第110页 |
| ·间接Dot-ELISA的最佳工作条件 | 第110-114页 |
| ·各组织的Dot-ELISA | 第110-112页 |
| ·截短蛋白pMGAⅣ的Dot-ELISA | 第112-113页 |
| ·特异性及重复性试验 | 第113页 |
| ·pMGA与膜蛋白结合的饱和试验 | 第113-114页 |
| 4 讨论 | 第114-116页 |
| 5 结论 | 第116-117页 |
| 第六章 结语 | 第117-119页 |
| 1 结论 | 第117页 |
| 2 创新点 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-136页 |
| 附录 在读期间发表的相关研究论文 | 第136-137页 |
| 致谢 | 第137页 |
