| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| 1. 乳源生物活性肽概述 | 第13-27页 |
| ·乳源性生物活性肽的来源和分类 | 第14页 |
| ·乳源生物活性肽的构效 | 第14-15页 |
| ·活性肽制备工艺研究现状 | 第15-18页 |
| ·基因工程乳肽的现状与前景展望 | 第18-19页 |
| ·功能肽基因重组表达技术发展的趋势——intein 介导的蛋白表达纯化技术 | 第19-23页 |
| ·研究目的及意义 | 第23-27页 |
| 第二章 利用基因工程技术在E.coli.BL21 中表达乳源生物活性小肽 | 第27-53页 |
| 1. 材料 | 第27-32页 |
| ·实验菌株 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·主要溶液的配制 | 第29-32页 |
| 2. 实验方法 | 第32-53页 |
| ·挑选生物活性肽段 | 第33-35页 |
| ·活性小肽编码基因的优化 | 第35-37页 |
| ·引物设计与合成 | 第37-38页 |
| ·目的基因的扩增及纯化 | 第38-40页 |
| ·目的基因扩增 | 第38-39页 |
| ·DNA 和RNA 的提取 | 第39页 |
| ·PCR 产物纯化、回收 | 第39-40页 |
| ·目的基因片段连接到克隆载体pMD18T | 第40页 |
| ·目的基因与载体连接 | 第40-41页 |
| ·PCR 产物和pTYB11 的酶切 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的转化 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的提取 | 第43-44页 |
| ·挑选阳性克隆并鉴定 | 第44-45页 |
| ·原核表达载体的构建和鉴定 | 第45页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及诱导条件的优化 | 第45-48页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·包涵体的提取 | 第48页 |
| ·重组蛋白的变、复性和纯化 | 第48-49页 |
| ·Western‐blot 检测重组蛋白的特异性 | 第49-51页 |
| ·融合蛋白的Chitin 亲和纯化 | 第51-53页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第53-73页 |
| 1. 实验结果 | 第53-69页 |
| ·乳源性生物活性肽基因扩增结果 | 第53-55页 |
| ·重组克隆载体的构建 | 第55-56页 |
| ·重组克隆载体的测序结果 | 第56-57页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第57-60页 |
| ·重组表达载体的测序结果 | 第60页 |
| ·重组质粒的诱导表达结果 | 第60-65页 |
| ·重组载体的表达鉴定 | 第61-62页 |
| ·重组表达菌株诱导条件的优化结果 | 第62-65页 |
| ·IPTG 浓度的影响 | 第62-64页 |
| ·IPTG 诱导时间的影响 | 第64页 |
| ·培养温度的影响 | 第64-65页 |
| ·Western‐blot 检测重组蛋白的特异性 | 第65-66页 |
| ·Chitin 亲和纯化和DTT 诱导剪切小肽 | 第66-67页 |
| ·利用SEC、RPLC 验证鉴定intein 介导自剪切小肽 | 第67-69页 |
| 2. 讨论 | 第69-73页 |
| 第四章 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
