| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-29页 |
| 1.组蛋白修饰是真核基因表达调控的重要方式 | 第12-21页 |
| ·真核基因表达调控具有层次性 | 第12-13页 |
| ·染色质水平的调控是真核基因表达调控的独特方式 | 第13-14页 |
| ·组蛋白乙酰化水平的变化具有重要意义——组蛋白乙酰转移酶和组蛋白去乙酰化酶 | 第14-21页 |
| ·Ⅰ类和Ⅱ类组蛋白去乙酰化酶的生物学功能 | 第15-17页 |
| ·SIRT1是Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶 | 第17-21页 |
| ·SIRT1可与多种转录因子相互作用 | 第18-20页 |
| ·SIRT1可影响组蛋白修饰水平 | 第20-21页 |
| 2.珠蛋白基因簇是研究真核基因表达调控的经典模型 | 第21-27页 |
| ·人珠蛋白基因簇结构与表达特点 | 第22-23页 |
| ·染色质结构的变化参与β-珠蛋白基因簇激活的全过程 | 第23-27页 |
| ·染色质结构变化也参与α-珠蛋白基因簇的调控 | 第27页 |
| 3.本研究的理论问题与主要内容 | 第27-29页 |
| 材料与方法 | 第29-46页 |
| 1.实验材料 | 第29-31页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·细胞系 | 第29页 |
| ·限制性内切酶及修饰酶 | 第29页 |
| ·抗体 | 第29-30页 |
| ·其它主要试剂和材料 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.实验方法 | 第31-46页 |
| ·基本技术路线 | 第31页 |
| ·细菌操作与质粒的转化 | 第31-33页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5-α制备 | 第31-32页 |
| ·质粒的转化 | 第32页 |
| ·质粒的提取和纯化 | 第32-33页 |
| ·细胞培养 | 第33-34页 |
| ·细胞的生长条件 | 第33页 |
| ·细胞的传代 | 第33页 |
| ·细胞的复苏及冻存 | 第33-34页 |
| ·K562细胞的红系诱导和检测 | 第34页 |
| ·K562细胞向红系分化的诱导 | 第34页 |
| ·K562细胞红系分化的检测 | 第34页 |
| ·细胞的转染和单克隆株筛选 | 第34-35页 |
| ·MTT分析细胞增殖情况 | 第35页 |
| ·半定量RT-PCR | 第35-37页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第35页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR检测 | 第36-37页 |
| ·Western-Blotting | 第37-40页 |
| ·细胞总蛋白提取 | 第37页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第37页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第37-38页 |
| ·胶的制备 | 第37-38页 |
| ·样品的制备和上样 | 第38页 |
| ·电泳 | 第38页 |
| ·转膜 | 第38页 |
| ·抗原抗体反应 | 第38-39页 |
| ·辣根过氧化物酶化学发光法检测蛋白 | 第39-40页 |
| ·染色质免疫沉淀(ChIP) | 第40-44页 |
| ·细胞培养 | 第40页 |
| ·细胞固定 | 第40页 |
| ·细胞核的提取 | 第40页 |
| ·细胞核的裂解与超声处理 | 第40-41页 |
| ·超声结果的分析 | 第41页 |
| ·免疫沉淀 | 第41页 |
| ·DNA的分离及纯化 | 第41-42页 |
| ·半定量PCR反应 | 第42-44页 |
| ·蛋白质免疫共沉淀 | 第44-46页 |
| ·细胞培养 | 第44页 |
| ·细胞裂解 | 第44-45页 |
| ·免疫沉淀 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE | 第45-46页 |
| 实验结果 | 第46-71页 |
| 1.抑制SIRT1表达对K562细胞增殖及珠蛋白基因表达的影响分析 | 第46-52页 |
| ·K562细胞中SIRT1干扰的稳定单克隆细胞株的筛选 | 第46页 |
| ·稳定中克隆细胞株SIRT1干扰效率的鉴定 | 第46-47页 |
| ·RT-PCR检测SIRT1的干扰效率 | 第46-47页 |
| ·Westen Blot检测SIRT1的干扰效率 | 第47页 |
| ·干扰SIRT1表达抑制K562细胞的增殖 | 第47-48页 |
| ·K562细胞中抑制SIRT1表达促进血红蛋白的生成 | 第48-49页 |
| ·K562细胞中抑制SIRT1表达促进珠蛋白基因的表达 | 第49-52页 |
| 2.过表达SIRT1HY对K562细胞增殖及珠蛋白基因表达的影响分析 | 第52-57页 |
| ·过表达SIRT1 HY稳定转染单克隆细胞株的筛选 | 第52页 |
| ·过表达SIRT1 HY稳定转染单克隆细胞株的鉴定 | 第52-53页 |
| ·RT-PCR鉴定过表达SIRT1HY稳定转染单克隆细胞株 | 第52-53页 |
| ·Westen Blot鉴定过表达SIRT1HY稳定转染单克隆细胞株 | 第53页 |
| ·过表达SIRT1HY抑制K562细胞的增殖 | 第53-54页 |
| ·K562细胞中过表达SIRT1HY促进血红蛋白的生成 | 第54-55页 |
| ·K562细胞中过表达SIRT1HY促进珠蛋白基因的表达 | 第55-57页 |
| 3.SIRT1调节珠蛋白基因表达的分子机制 | 第57-71页 |
| ·SIRT1住珠蛋白基因簇上的募集 | 第57-60页 |
| ·ChIP分析条件的建立 | 第58-59页 |
| ·SIRT1在α-珠蛋白基因簇上的募集 | 第59-60页 |
| ·SIRT1在β-珠蛋白基因簇上的募集 | 第60页 |
| ·SIRT1调节珠蛋白基因簇的组蛋白修饰状态 | 第60-66页 |
| ·SIRT1调节α-珠蛋广1基因簇的组蛋白修饰状态 | 第61-63页 |
| ·SIRT1调节β-珠蛋广1基因簇的组蛋白修饰状态 | 第63-66页 |
| ·SIRT1与红系相关的转录因子 | 第66-71页 |
| ·SIRT1与红系相关转录因子的表达 | 第66-68页 |
| ·SIRT1与红系相关转录因子的表达(mRNA水平) | 第66-68页 |
| ·SIRT1与红系相关转录因子的表达(蛋白水平) | 第68页 |
| ·SIRT1与红系相关转录因子的乙酰化修饰水平(GATA-1) | 第68-69页 |
| ·SIRT1与红系相关转录因子在B-珠蛋白基因簇上的募集(GATA-1、NF-E2/P45) | 第69-71页 |
| 讨论 | 第71-82页 |
| 1.SIRT1以去乙酰化酶活性依赖的方式调节珠蛋白基因的表达 | 第71-73页 |
| ·SIRT1可以调节珠蛋白基因的表达 | 第71-72页 |
| ·SIRT1对珠蛋白基因表达的调节是去乙酰化酶活性依赖的 | 第72-73页 |
| 2.SIRT1通过调节珠蛋白基因簇上调控区的组蛋白修饰状态来调控珠蛋白基因表达 | 第73-77页 |
| ·SIRT1在α/β珠蛋白基因簇远端调控区(LCR/MRE)特定高敏位点募集并调节乙酰化修饰水平 | 第73-75页 |
| ·SIRT1调控珠蛋白基因表达的复杂性 | 第75-77页 |
| 3.未检测到参与SIRT1调控珠蛋白基因表达的转录因子 | 第77-78页 |
| 4.SIRT1可能调节红系分化 | 第78-80页 |
| 5.本研究不足之处和今后的工作设想 | 第80-81页 |
| 小结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-90页 |
| 文献综述 | 第90-113页 |
| 英文名词及缩写 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 个人简历 | 第116-118页 |
