| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 缩略词 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论(神经退行性疾病与蛋白质翻译后修饰) | 第13-33页 |
| ·铜锌过氧化物歧化酶(SOD1)与家族型肌萎缩侧索硬化症(ALS) | 第13-18页 |
| ·肌萎缩侧索硬化症(ALS) | 第13-15页 |
| ·铜锌过氧化物歧化酶(SOD1) | 第15页 |
| ·SOD1与FALS | 第15-18页 |
| ·SUMO化修饰与神经退行性疾病 | 第18-25页 |
| ·SUMO蛋白家族 | 第18-20页 |
| ·SUMO结合与去结合 | 第20-21页 |
| ·SUMO化修饰的结果 | 第21-23页 |
| ·SUMO化作用与神经退行性疾病 | 第23-25页 |
| ·Ataxin-3与脊髓小脑共济失调Ⅲ型(SCA3)/马查多-约瑟夫病(MJD) | 第25-29页 |
| ·SCA3/MJD概述 | 第25页 |
| ·Ataxin-3 | 第25-29页 |
| ·突变的ataxin-3与SCA3/MJD | 第29页 |
| ·磷酸化以及肝糖原合成酶激酶3β(GSK 3β)与神经退行性疾病 | 第29-33页 |
| ·磷酸化与神经退行性疾病 | 第29-31页 |
| ·肝糖原合成酶激酶3β(GSK 3β) | 第31-32页 |
| ·GSK 3β与神经退行性疾病 | 第32-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-53页 |
| ·细胞总RNA的提取及逆转录cDNA | 第33-34页 |
| ·聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR) | 第34页 |
| ·DNA样品的琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| ·从琼脂糖凝胶上回收DNA片段(TaKaRa Agrose Gel DNA Purification Kit) | 第35页 |
| ·质粒DNA或DNA片段的限制内切性酶酶切 | 第35页 |
| ·DNA片段的连接反应(TaKaRa DNA Ligation Kit) | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌(JM109和BL21(DE3))化学感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌质粒DAN小量抽提 | 第37页 |
| ·基于PCR的DNA定点突变 | 第37-38页 |
| ·本论文中所用质粒载体的构建 | 第38-40页 |
| ·大肠杆菌中蛋白质诱导表达 | 第40-41页 |
| ·蛋白质的SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第41-43页 |
| ·GST-Tag融合蛋白的小量纯化 | 第43-44页 |
| ·His-Tag融合蛋白的小量纯化 | 第44页 |
| ·经纯化所得到的蛋白溶液的脱盐与浓缩 | 第44-45页 |
| ·GST Pull-down | 第45页 |
| ·体外SUMO化反应(In Vitro SUMOylation Assay) | 第45-46页 |
| ·体外磷酸化反应(In vitro Phosphorylation Assay) | 第46-47页 |
| ·Western Blot | 第47-48页 |
| ·细胞培养 | 第48-49页 |
| ·细胞转染(脂质体转染法) | 第49页 |
| ·细胞的裂解以及NP-40可溶性与不可溶性蛋白的分别收集 | 第49-50页 |
| ·免疫共沉淀(Co-immunocipitation,Co-IP) | 第50-51页 |
| ·细胞的荧光观察以及蛋白聚集的定量 | 第51-52页 |
| ·蛋白降解实验 | 第52-53页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第53-73页 |
| ·SUMO-1对人源SOD1的修饰促进其稳定性和聚集 | 第53-63页 |
| ·人源SOD1在HEK 293细胞内和体外均可被SUMO-1修饰 | 第53-56页 |
| ·SOD1第75位赖氨酸被SUMO-1修饰 | 第56-57页 |
| ·SUMO-2和SUMO-3不能修饰SOD1 | 第57-58页 |
| ·SOD1的SUMO化修饰促进SOD1聚集的形成 | 第58-60页 |
| ·SOD1的SUMO化修饰促进SOD1的稳定性 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·肝糖原合成酶激酶3β(GSK 3β)对ataxin-3第256位丝氨酸的磷酸化调节ataxin-3的聚集 | 第63-71页 |
| ·Ataxin-3与GSK 3β结合 | 第63-65页 |
| ·GSK 3β对ataxin-3第256位丝氨酸进行磷酸化 | 第65-67页 |
| ·扩展ataxin-3的S256A突变体在293细胞中是积聚成多聚化的,而且该多聚化可被Hsp70抑制 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| ·总结与展望 | 第71-73页 |
| ·总结 | 第71-72页 |
| ·展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与参加的学术会议 | 第85页 |
