| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-17页 |
| 第一章 文献综述:鱼类的补体和穿孔素 | 第17-39页 |
| 1 鱼类补体系统研究进展 | 第18-29页 |
| ·鱼类补体活化途径与补体系统的进化 | 第18-20页 |
| ·补体的活化途径 | 第18-19页 |
| ·补体系统的进化 | 第19-20页 |
| ·补体的合成和发生 | 第20-22页 |
| ·补体成分的合成 | 第20-21页 |
| ·鱼类补体的发生 | 第21-22页 |
| ·鱼类补体末端成分(TCC)研究进展 | 第22-26页 |
| ·MAC的组装 | 第22-23页 |
| ·TCC的结构特征 | 第23页 |
| ·鱼类TCC研究进展 | 第23-25页 |
| ·TCC基因的进化 | 第25-26页 |
| ·鱼类补体的特性 | 第26-27页 |
| ·鱼类补体具有较低的反应温度 | 第26页 |
| ·鱼类具有较高的ACP活性 | 第26页 |
| ·鱼类补体成分的多态性 | 第26-27页 |
| ·鱼类补体的生物学作用 | 第27-29页 |
| ·鱼类补体和宿主防御 | 第27-28页 |
| ·鱼类补体的溶血活性 | 第28页 |
| ·鱼类补体的调理作用 | 第28页 |
| ·鱼类补体引起的炎症反应 | 第28-29页 |
| ·鱼类补体引起的免疫复合物的清除 | 第29页 |
| 2 穿孔素(PFP)研究进展 | 第29-37页 |
| ·细胞毒T淋巴细胞(CTL)和PFP | 第29-30页 |
| ·PFP的结构与功能 | 第30-32页 |
| ·PFP的分子结构 | 第30-31页 |
| ·PFP和C9的结构关系 | 第31页 |
| ·PFP功能区预测 | 第31-32页 |
| ·PFP的作用机制 | 第32-33页 |
| ·PFP的细胞内转运 | 第32页 |
| ·PFP的溶细胞机制 | 第32-33页 |
| ·PFP对杀伤细胞的保护机制 | 第33页 |
| ·PFP的表达与调节 | 第33-34页 |
| ·PFP的生物学作用 | 第34-36页 |
| ·PFP与免疫调节 | 第34-35页 |
| ·PFP与病原感染 | 第35页 |
| ·PFP与肿瘤免疫 | 第35-36页 |
| ·PFP与免疫疾病 | 第36页 |
| ·PFP与移植反应 | 第36页 |
| ·鱼类细胞毒与PFP研究进展 | 第36-37页 |
| 3 本研究的目的及内容 | 第37-39页 |
| 第二章 草鱼补体C9基因的克隆与表达 | 第39-81页 |
| 1 前言 | 第39-40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-58页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·试剂盒与主要试剂 | 第41-42页 |
| ·试剂盒与酶 | 第41-42页 |
| ·主要生化试剂 | 第42页 |
| ·载体和菌株 | 第42-43页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·核酸的提取和纯化 | 第43-44页 |
| ·RNA的提取 | 第43-44页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第44页 |
| ·GcC9 cDNA全长的获得与序列分析 | 第44-48页 |
| ·SMART cDNA第一链的合成 | 第44-45页 |
| ·RACE-PCR扩增gcC9 cDNA全长 | 第45-48页 |
| ·GcC9 cDNA全长序列分析及系统进化树的构建 | 第48页 |
| ·GcC9基因全长的获得及启动子区域的扩增 | 第48-51页 |
| ·GcC9基因全长的的扩增 | 第48页 |
| ·启动子区域的扩增 | 第48-51页 |
| ·RT-PCR检测草鱼组织中C9转录水平的表达 | 第51-52页 |
| ·草鱼早期发育阶段C9转录水平的表达 | 第52页 |
| ·实时荧光定量PCR检测gcC9的诱导表达变化 | 第52-54页 |
| ·实验鱼的诱导处理与样品的获得 | 第52-53页 |
| ·质粒标准样品的制备 | 第53-54页 |
| ·实时荧光定量PCR检测gcC9的诱导变化 | 第54页 |
| ·GcC9的原核表达 | 第54-57页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第54-56页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第56页 |
| ·变性条件下纯化目的蛋白 | 第56-57页 |
| ·兔多克隆抗体的制备 | 第57页 |
| ·Western blot检测gcC9蛋白水平的表达 | 第57-58页 |
| ·组织蛋白的提取 | 第57-58页 |
| ·免疫印迹分析 | 第58页 |
| 3 结果 | 第58-77页 |
| ·核酸质量和酶切效果 | 第58页 |
| ·GcC9 cDNA全长及推导的氨基酸序列特征 | 第58-65页 |
| ·GcC9的系统进化分析 | 第65-70页 |
| ·GcC9的基因组结构和启动子分析 | 第70-72页 |
| ·GcC9在健康草鱼组织转录水平的表达 | 第72页 |
| ·早期发育阶段gcC9的表达 | 第72-73页 |
| ·实时荧光定量PCR检测gcC9的诱导表达变化 | 第73-75页 |
| ·GcC9的原核表达 | 第75-77页 |
| ·Western blot检测gcC9组织蛋白水平的表达 | 第77页 |
| 4 讨论 | 第77-81页 |
| 第三章 草鱼穿孔素基因的克隆与表达 | 第81-120页 |
| 1 前言 | 第81-82页 |
| 2 材料与方法 | 第82-86页 |
| ·草鱼PFP基因cDNA全长获得与序列分析 | 第82-83页 |
| ·GcPFP基因全长的扩增 | 第83页 |
| ·RT-PCR检测草鱼成鱼组织中PFP转录水平的表达 | 第83-84页 |
| ·草鱼早期发育阶段PFP转录水平的表达 | 第84页 |
| ·实时荧光定量PCR检测gcPFP的诱导表达变化 | 第84页 |
| ·GcPFP基因的原核表达 | 第84-86页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第84-85页 |
| ·重组蛋白的诱导表达和纯化 | 第85页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第85-86页 |
| ·Western blot检测草鱼组织PFP蛋白水平的表达 | 第86页 |
| 3 结果 | 第86-115页 |
| ·GcPFP cDNA全长及推断的氨基酸序列特征 | 第86-92页 |
| ·GcPFP-1的cDNA及推断的氨基酸的性质 | 第86-89页 |
| ·GcPFP-2的cDNA及推断的氨基酸的性质 | 第89-92页 |
| ·GcPFP蛋白的结构分析 | 第92-94页 |
| ·GcPFP的进化分析 | 第94-99页 |
| ·GcPFP的基因组结构 | 第99-100页 |
| ·PFP同源结构蛋白在模式生物基因组的多样性 | 第100-103页 |
| ·GcPFP转录水平的表达 | 第103-104页 |
| ·早期发育阶段gcPFP基因的表达 | 第104-105页 |
| ·实时荧光定量PCR检测gcPFP的诱导表达变化 | 第105-108页 |
| ·GcPFP的原核表达 | 第108-111页 |
| ·Western blot检测gcPFP组织蛋白水平的表达 | 第111-112页 |
| ·补体C9和PFP基因的进化关系 | 第112-115页 |
| 4 讨论 | 第115-120页 |
| ·鱼类PFP基因存在多态性 | 第115-117页 |
| ·PFP与补体C9的关系 | 第117-120页 |
| 参考文献 | 第120-139页 |
| 附录 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
