胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ △orf1缺失株的构建及生物学特性研究
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-24页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎研究进展 | 第12-20页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的危害 | 第12页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎病原学 | 第12-16页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的发现历史 | 第12-13页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的生物学特性及血清分型 | 第13-14页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的毒力因子 | 第14-16页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的外毒素研究进展 | 第16-17页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的防治 | 第17-20页 |
| ·药物治疗 | 第17-18页 |
| ·免疫预防 | 第18-20页 |
| ·APP突变株构建方法的研究进展 | 第20-24页 |
| ·自然突变 | 第21页 |
| ·人工化学诱变 | 第21页 |
| ·分子生物学方法 | 第21-24页 |
| ·转座子突变技术 | 第21-22页 |
| ·同源重组技术 | 第22-24页 |
| 第2章 研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第3章 材料和方法 | 第25-34页 |
| ·试验材料 | 第25-28页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第25-26页 |
| ·酶、抗生素及试剂盒 | 第26页 |
| ·培养基及抗生素的配制 | 第26-27页 |
| ·主要溶液的配制 | 第27-28页 |
| ·常用贮存液的配制 | 第27页 |
| ·细菌基因组DNA提取溶液 | 第27-28页 |
| ·引物 | 第28页 |
| ·实验动物 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28-34页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的增殖 | 第28-29页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌基因组的提取 | 第29页 |
| ·PCR产物和酶切产物的回收与纯化 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·质粒的制备 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·orfl基因上下游同源臂的克隆与鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组自杀性质粒pEMORF的构建 | 第31页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌基因缺失株的构建 | 第31-32页 |
| ·缺失菌株生物学特性的研究 | 第32页 |
| ·缺失株生长特性的研究 | 第32页 |
| ·缺失株遗传稳定性的研究 | 第32页 |
| ·缺失菌株对小鼠的毒力试验及LD50的测定 | 第32页 |
| ·缺失株与亲本株的致病性比较 | 第32页 |
| ·缺失菌株对断奶仔猪的免疫保护试验 | 第32-34页 |
| 第4章 结果与分析 | 第34-46页 |
| ·重组自杀性质粒pEMORF的构建 | 第34-35页 |
| ·orf基因上下游片段的扩增与测序 | 第34页 |
| ·重组自杀性质粒pEMORF的构建 | 第34-35页 |
| ·基因缺失株的筛选和鉴定 | 第35-39页 |
| ·基因缺失株SLW04的筛选和鉴定 | 第35-37页 |
| ·基因缺失株SLW05的筛选和鉴定 | 第37-39页 |
| ·突变株生物学特性的研究 | 第39-41页 |
| ·突变株生长特性的研究 | 第39-40页 |
| ·突变株遗传稳定性的研究 | 第40-41页 |
| ·缺失菌株的毒力研究 | 第41-42页 |
| ·缺失菌株对小鼠LD50的测定 | 第41页 |
| ·缺失株与亲本株对仔猪致病性的比较 | 第41-42页 |
| ·缺失株SLW05对断奶仔猪的免疫保护试验 | 第42-46页 |
| ·免疫仔猪血清抗体检测结果 | 第42页 |
| ·临床症状 | 第42-44页 |
| ·攻毒后仔猪的体温变化 | 第44页 |
| ·肺损伤 | 第44页 |
| ·细菌的回收鉴定 | 第44-46页 |
| 第5章 讨论 | 第46-48页 |
| ·对亲本菌株的选择 | 第46-47页 |
| ·基因缺失株的毒力 | 第47页 |
| ·缺失株的免疫保护性试验 | 第47页 |
| ·展望 | 第47-48页 |
| 第6章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
