| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-28页 |
| 1 植物抗坏血酸的研究进展 | 第14-23页 |
| ·抗坏血酸的生物学功能 | 第14-16页 |
| ·作为抗氧化剂保护植物体免受氧化损伤 | 第14页 |
| ·抗坏血酸在细胞壁代谢和细胞膨大中的作用 | 第14-15页 |
| ·抗坏血酸在细胞分裂和分化中的作用 | 第15页 |
| ·抗坏血酸在光合作用和光保护中的作用 | 第15页 |
| ·作为一些酶的辅酶和底物 | 第15-16页 |
| ·植物抗坏血酸的生物合成 | 第16-17页 |
| ·植物抗坏血酸的代谢 | 第17-18页 |
| ·AsA合成代谢相关酶基因的克隆及基因调控研究 | 第18-21页 |
| ·GLDH基因研究进展 | 第19-20页 |
| ·AO基因研究进展 | 第20-21页 |
| ·RNAi研究进展 | 第21-23页 |
| 2 芸薹属植物转基因研究进展 | 第23-28页 |
| ·农杆菌介导法转基因 | 第23-25页 |
| ·农杆菌介导遗传转化的优势 | 第23-24页 |
| ·影响农杆菌介导的遗传转化的主要因素 | 第24-25页 |
| ·农杆菌种类 | 第24页 |
| ·植物基因型及外植体种类 | 第24页 |
| ·转化及培养条件 | 第24-25页 |
| ·抑制农杆菌生长的抗生素 | 第25页 |
| ·转化细胞的选择 | 第25页 |
| ·不结球白菜转基因研究进展 | 第25-28页 |
| ·基因型对不定芽的再生的影响 | 第26页 |
| ·外植体类型及生理状态对不定芽再生的影响 | 第26-27页 |
| ·植物激素对不定芽再生的影响 | 第27页 |
| ·AgNO_3对不定芽再生的影响 | 第27-28页 |
| 第二部分 研究报告 | 第28-72页 |
| 第一章 不结球白菜离体培养与植株再生技术研究 | 第28-36页 |
| 1 材料和方法 | 第28-29页 |
| ·供试材料 | 第28页 |
| ·无菌苗的培养 | 第28-29页 |
| ·不定芽诱导 | 第29页 |
| ·不定芽继代,生根与驯化移栽 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-34页 |
| ·外植体对离体培养的反应 | 第29页 |
| ·激素浓度对不定芽分化的影响 | 第29-30页 |
| ·AgNO_3在不定芽分化中的作用 | 第30-31页 |
| ·AsA对不定芽分化的影响 | 第31-32页 |
| ·琼脂浓度对不定芽分化的影响 | 第32页 |
| ·苗龄对不定芽诱导的影响 | 第32-33页 |
| ·再生苗的继代、生根和移栽 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第二章 不结球白菜GLDH基因植物过量表达载体构建及其转基因功能验证 | 第36-48页 |
| 1 材料和方法 | 第36-41页 |
| ·植物过量表达载体的构建 | 第36-39页 |
| ·植物材料和质粒 | 第36-37页 |
| ·酶和试剂 | 第37页 |
| ·RNA的提取 | 第37页 |
| ·目的基因的TA克隆 | 第37页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301-GLDH构建 | 第37页 |
| ·植物表达载体质粒转化农杆菌 | 第37-39页 |
| ·制备农杆菌感受态 | 第37-38页 |
| ·载体转化农杆菌 | 第38-39页 |
| ·植物材料的培养和转化 | 第39-40页 |
| ·农杆菌侵染液的准备 | 第39页 |
| ·外植体的预培养,侵染和共培养 | 第39页 |
| ·不定芽再生,筛选和植株形成 | 第39-40页 |
| ·实验所用培养基配方 | 第40页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第40-41页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第40-41页 |
| ·DNA提取及PCR检测 | 第41页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第41页 |
| ·植株Vc含量测定 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-46页 |
| ·目的基因的克隆 | 第41-42页 |
| ·植物过量表达载体pCAMBIA2301-GLDH构建 | 第42-43页 |
| ·GUS瞬时表达检测 | 第43页 |
| ·转基因植株PCR鉴定 | 第43-44页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第44-45页 |
| ·转基因植株Vc含量测定 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 不结球白菜GLDH基因植物RNAi表达载体构建及其转基因功能验证 | 第48-58页 |
| 1 材料和方法 | 第48-51页 |
| ·植物RNAi表达载体的构建 | 第48-51页 |
| ·植物材料和质粒 | 第48-49页 |
| ·酶和试剂 | 第49页 |
| ·RNA的提取 | 第49页 |
| ·反转录和RT-PCR | 第49页 |
| ·PCR产物的克隆与测序 | 第49页 |
| ·中间载体的构建 | 第49-50页 |
| ·RNAi载体的构建 | 第50-51页 |
| ·植物表达载体质粒转化农杆菌 | 第51页 |
| ·植物材料的培养和转化 | 第51页 |
| ·农杆菌侵染液的准备 | 第51页 |
| ·外植体的预培养,侵染和共培养 | 第51页 |
| ·不定芽再生,筛选和植株形成 | 第51页 |
| ·实验所用培养基配方 | 第51页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第51页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第51页 |
| ·DNA提取及PCR检测 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-55页 |
| ·叶片总RNA的提取 | 第51-52页 |
| ·基因的克隆与序列分析 | 第52页 |
| ·重组基因的克隆与鉴定 | 第52-53页 |
| ·GLDH基因RNAi载体的构建与鉴定 | 第53页 |
| ·载体在农杆菌中的转化 | 第53-54页 |
| ·GUS瞬时表达检测 | 第54-55页 |
| ·转基因植株PCR鉴定 | 第55页 |
| 3 讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 不结球白菜抗坏血酸氧化酶基因cDNA全长克隆及表达分析 | 第58-72页 |
| 1 材料与方法 | 第58-65页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·植物材料 | 第59页 |
| ·菌株与质粒 | 第59页 |
| ·各种酶类 | 第59页 |
| ·试剂盒 | 第59页 |
| ·常用储液 | 第59页 |
| ·Southern杂交所需溶液及物品 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-65页 |
| ·植物材料的准备 | 第60页 |
| ·基因组DNA,总RNA的提取 | 第60页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第60页 |
| ·总RNA的提取 | 第60页 |
| ·单链cDNA的合成 | 第60页 |
| ·引物的设计 | 第60-61页 |
| ·PCR扩增 | 第61页 |
| ·3'RACE | 第61页 |
| ·5'RACE | 第61-62页 |
| ·1st Strand cDNA的合成 | 第61页 |
| ·cDNA的纯化 | 第61-62页 |
| ·cDNA的末端加尾 | 第62页 |
| ·第一轮PCR反应 | 第62页 |
| ·第二轮PCR反应 | 第62页 |
| ·目的片段的回收及克隆 | 第62-63页 |
| ·目的片段的回收 | 第62页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5α的制备 | 第62-63页 |
| ·重组质粒的构建 | 第63页 |
| ·重组质粒的转化 | 第63页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第63页 |
| ·序列测定及分析 | 第63页 |
| ·Southern杂交分析 | 第63-65页 |
| ·杂交探针的制备 | 第63-64页 |
| ·DNA的提取、酶切及电泳 | 第64页 |
| ·转膜 | 第64页 |
| ·杂交 | 第64页 |
| ·显色 | 第64-65页 |
| ·荧光定量PCR检测黑霉病诱导AO转录表达 | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-70页 |
| ·不结球白菜AO基因RT-PCR扩增 | 第65-66页 |
| ·AO基因3'RACE和5'RACE扩增 | 第66-68页 |
| ·不结球白菜BcAAO基因序列分析 | 第68-69页 |
| ·不结球白菜BcAAO基因的蛋白结构特征分析 | 第69页 |
| ·Southern杂交检测BcAAO基因的拷贝数 | 第69-70页 |
| ·黑霉病诱导BcAAO基因转录表达分析 | 第70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 全文结论 | 第80-82页 |
| 论文发表情况 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
