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家蚕无鳞片翅突变体scaleless产生机理的研究

摘要第1-8页
Abstract第8-17页
第一章 引言第17-30页
   ·国内外研究现状(文献综述)第17-27页
     ·完全变态昆虫的成虫盘之一——翅原基第17-18页
     ·鳞翅目昆虫的翅面鳞片第18-19页
     ·果蝇刚毛的发育第19-21页
     ·achaete-scute复合体(AS-C)及其同源体(ASH)第21-23页
     ·氧气供应与鳞片发育的关系及气管发生的调控机制第23-24页
     ·家蚕血球的生成机理第24-27页
   ·研究目的和意义第27-28页
     ·研究目的第27页
     ·研究意义第27-28页
   ·研究内容第28-30页
     ·家蚕翅原基发育规律的研究及翅原基摘除、移植技术的建立第28页
     ·家蚕无鳞片翅突变体scaleless的形态学分析第28页
     ·家蚕无鳞片翅突变体scaleless蛹期翅面细胞凋亡研究第28页
     ·家蚕AS-C同源体基因的克隆、鉴定与分析第28-29页
     ·家蚕无鳞片翅突变体scaleless形成的分子机理第29-30页
第二章 家蚕翅原基发育规律的研究第30-37页
   ·材料与方法第30-31页
     ·家蚕第30页
     ·翅原基的解剖与测量第30-31页
     ·翅原基的摘除实验第31页
     ·翅原基的移植实验第31页
   ·结果第31-35页
     ·五龄幼虫及变态过程中翅原基的大小变化第31-32页
     ·家蚕五龄幼虫翅原基及蛹期翅芽形态的变化第32-33页
     ·家蚕翅原基的摘除第33-34页
     ·家蚕翅原基的移植第34-35页
   ·讨论第35-37页
第三章 造血器官-翅原基复合体摘除对家蚕造血功能的影响第37-43页
   ·材料与方法第37-38页
     ·家蚕第37页
     ·造血器官-翅原基复合体的摘除第37-38页
     ·造血器官-翅原基复合体全部摘除后家蚕幼虫的外源激素处理第38页
     ·血细胞记数第38页
   ·结果第38-41页
     ·全部造血器官-翅原基复合体摘除后家蚕的发育情况第38-39页
     ·造血器官-翅原基复合体全部摘除对家蚕五龄幼虫体内血球数的影响第39页
     ·外源激素对4HWC家蚕体内血球数的影响第39-40页
     ·摘除不同数量翅原基对熟蚕体内血球数的影响第40-41页
   ·讨论第41-43页
第四章 家蚕无鳞片翅突变体scaleless的形态学分析第43-51页
   ·材料与方法第43-45页
     ·家蚕第43-44页
     ·突变体scaleless与野生型家蚕翅(翅原基)的形态比较第44页
     ·突变体scaleless与野生型家蚕之间翅原基的解剖及相互异位移植第44页
     ·翅原基受伤对鳞片和翅发育的影响第44页
     ·高氧分压处理蚕蛹第44-45页
     ·气管丛的解剖第45页
   ·结果第45-49页
     ·WT与scaleless成虫翅的形态比较第45-46页
     ·WT与scaleless家蚕间的翅原基相互异位移植第46页
     ·WT与scaleless家蚕五龄幼虫翅原基及蛹期翅芽的解剖与观察第46-47页
     ·翅原基表面划痕和主气管切断对鳞片和翅发育的影响第47-48页
     ·高氧分压对翅面鳞片发育的影响第48-49页
     ·无鳞片翅突变体scaleless与野生型家蚕气管系统的比较第49页
   ·讨论第49-51页
第五章 家蚕无鳞片翅突变体scaleless蛹期翅面细胞凋亡研究第51-58页
   ·材料与方法第52-53页
     ·家蚕第52页
     ·吖啶橙/溴化乙锭(Acridine Orange/Ethidium Bromide,AO/EB)和Hoechst染色第52页
     ·Caspase-3/7活性检测第52-53页
     ·DNA片断化检测第53页
   ·结果第53-56页
     ·AO/EB染色结果表明scaleless蛹翅面细胞在发育过程中大量死亡第53-55页
     ·Caspase-3/7活性检测结果表明翅面上的细胞死亡是由凋亡引起的第55-56页
     ·scaleless蛹翅中凋亡小体和DNA片段化现象明显第56页
   ·讨论第56-58页
第六章 家蚕AS-C同源体基因的克隆、鉴定与功能分析第58-85页
   ·材料与方法第58-67页
     ·家蚕第58页
     ·菌种与质粒第58页
     ·总RNA抽提第58-59页
     ·甲醛变性琼脂糖凝胶电泳第59-60页
     ·反转录PCR(RT-PCR)第60页
     ·cDNA末端快速扩增RACE(SMART-RACE cDNA amplification kit,Clontech)第60-61页
     ·质粒DNA少量抽提第61页
     ·DNA和RNA浓度测定第61页
     ·质粒DNA的限制性内切酶反应第61-62页
     ·DNA电泳和DNA胶回收第62页
     ·DNA连接第62页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第62-63页
     ·质粒DNA或连接产物的转化第63页
     ·重组质粒的鉴定第63页
     ·家蚕基因组DNA的制备(赵巧玲等,2000)第63-64页
     ·Southern杂交第64-65页
     ·实时荧光定量RT-PCR(Realtime Quantitative RT-PCR)第65-66页
     ·DNA和蛋白质序列的比对及进化分析第66页
     ·本章所用PCR引物列表第66-67页
   ·结果第67-79页
     ·家蚕AS-C同源体基因Bm-ASH1 cDNA的克隆第67-68页
     ·家蚕AS-C同源体基因Bm-ASH2、Bm-ASH3及Bm-ase cDNA的克隆第68-71页
     ·家蚕ASH基因与其他昆虫ASH基因的同源性比较第71-73页
     ·昆虫ASH基因的进化分析第73-74页
     ·家蚕ASH基因在不同组织中的表达分布第74-75页
     ·家蚕ASH基因在胚胎发育过程中的表达时相第75-77页
     ·家蚕ASH基因结构分析第77-79页
   ·讨论第79-85页
第七章 家蚕无鳞片翅突变体scaleless形成的分子机理的初步探讨第85-110页
   ·材料与方法第85-96页
     ·家蚕第85-86页
     ·菌种与质粒第86页
     ·半定量RT-PCR第86页
     ·原位杂交第86-88页
     ·昆虫细胞操作第88-89页
     ·DNA点突变的引入第89页
     ·质粒DNA的大量抽提第89-90页
     ·家蚕蛹翅核蛋白抽提(Blough et al.,1999;Feng et al.,2000)第90-91页
     ·凝胶阻滞分析第91-94页
     ·DNA碱性电泳第94页
     ·质粒介导的功能基因在家蚕蛹翅中的过量表达第94页
     ·本章所用引物和寡核苷酸序列列表第94-96页
   ·结果第96-107页
     ·家蚕ASH基因在翅原基和蛹翅中的表达时相第96页
     ·家蚕Bm-ASH1和Bm-ASH2基因在家蚕蛹翅中的表达分布第96-99页
     ·家蚕Bm-ASH2基因启动子活性分析第99-103页
     ·突变体家蚕Bm-ASH2基因启动子缺失区段与核蛋白结合实验第103页
     ·家蚕突变体scaleless的遗传学分析第103-104页
     ·家蚕Bm-ASH2基因在sl蛹翅中过量表达对蛾翅表型的影响第104-107页
   ·讨论第107-110页
第八章 结论第110-113页
参考文献第113-122页
致谢第122-123页
作者简历第123页

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