| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| ·PVY概述 | 第10-11页 |
| ·PVY在烟草上的危害 | 第10页 |
| ·PVY生物学特性 | 第10页 |
| ·PVY株系分化 | 第10-11页 |
| ·CMV概述 | 第11页 |
| ·CMV在烟草上的危害 | 第11页 |
| ·CMV生物学特性 | 第11页 |
| ·CMV株系分化 | 第11页 |
| ·植物抗病毒基因工程进展 | 第11-13页 |
| ·CP基因 | 第11-12页 |
| ·病毒复制酶基因 | 第12页 |
| l.3.3 反义RNA(antisense RNA) | 第12页 |
| ·核酶基因 | 第12页 |
| ·卫星RNA | 第12-13页 |
| ·移动蛋白基因 | 第13页 |
| ·植物来源的抗性基因 | 第13页 |
| ·RNA沉默的研究进展及在植物抗病毒基因工程中的应用 | 第13-18页 |
| ·RNA沉默的作用机制 | 第13-17页 |
| ·RNA沉默在植物抗病毒中的应用 | 第17-18页 |
| ·研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| ·主要研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-31页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·质粒载体和菌株 | 第20页 |
| ·植物材料与毒源 | 第20页 |
| ·酶与试剂 | 第20页 |
| ·常用培养基和溶液的配制 | 第20-23页 |
| ·细菌常用培养基 | 第20-21页 |
| ·植物组织培养与转化常用培养基 | 第21页 |
| ·常用溶液的配制 | 第21-22页 |
| ·其他溶液的配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及热击转化 | 第23-24页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备及电击转化 | 第24页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第24-26页 |
| ·DNA操作 | 第26-28页 |
| ·病毒的接种 | 第28页 |
| ·农杆菌介导的叶盘法转化烟草 | 第28页 |
| ·植物组织核酸的提取 | 第28-29页 |
| ·转化苗抗性检测 | 第29-31页 |
| 第三章 结果与分析 | 第31-43页 |
| ·靶标序列的确定与克隆 | 第31-34页 |
| ·靶标序列的确定 | 第31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·靶标序列的克隆 | 第31-34页 |
| ·干扰载体的构建 | 第34-40页 |
| ·目的片段的串联 | 第34-36页 |
| ·中间载体的反向连接 | 第36-37页 |
| ·中间载体的正向连接 | 第37-38页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第40-41页 |
| ·抗性检测 | 第41-43页 |
| 第四章 讨论 | 第43-45页 |
| ·靶标序列的选取问题 | 第43页 |
| ·靶标序列的同源性问题 | 第43页 |
| ·pSK-intron载体的选用问题 | 第43页 |
| ·GUS基因的替换问题 | 第43页 |
| ·构建双价载体的问题 | 第43-44页 |
| ·转化苗的抗性问题 | 第44页 |
| ·基因沉默技术的应用问题 | 第44-45页 |
| 第五章 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简历 | 第53页 |