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禽传染性支气管炎病病毒分离株的鉴定及3CL基因片段的序列分析

摘要第1-11页
Abstract第11-14页
引言第14-36页
 1.鸡传染性支气管炎研究进展第14-17页
   ·鸡传染性支气管炎概述第14页
   ·国内外研究现状第14-17页
     ·国外流行情况第14-16页
     ·国内流行情况第16-17页
 2.鸡传染性支气管炎病毒的研究进展第17-34页
   ·鸡传染性支气管炎病毒第17-18页
   ·IBV的分型第18-21页
     ·免疫型第18-19页
     ·抗原分型第19-20页
     ·基因型第20页
     ·临床分型第20-21页
   ·IBV的血凝特性第21-22页
   ·IBV的培养第22-23页
   ·传染性支气管炎病毒基因组结构第23-29页
     ·传染性支气管炎病毒的结构蛋白第24-27页
     ·非结构蛋白第27-29页
   ·病毒的复制第29-30页
   ·致病机理第30-31页
   ·潜伏期第31-32页
   ·IBV的临床症状第32-33页
   ·IBV组织病理学变化第33-34页
 3.存在的问题第34-36页
一、材料和方法第36-45页
 1.病毒分离第36页
   ·材料和方法第36页
     ·病料第36页
     ·细菌分离第36页
     ·病毒分离第36页
 2.电镜观察第36-37页
   ·离子交换捕捉技术原理第36-37页
   ·病毒浓缩第37页
   ·样品处理第37页
   ·负染色第37页
 3.血凝试验第37-38页
   ·材料和方法第37页
   ·实验方法第37-38页
     ·IBV的血凝实验(HA)第37-38页
 4.病毒的制备第38-39页
     ·材料和方法第38页
     ·实验材料第38页
   ·气管环培养物制备(TOC)第38-39页
   ·病毒感染力的测定第39页
   Reed-Muench法计算TOC-ID50第39页
 5.致病性实验和病理切片制备第39-40页
   ·致病性试验第39页
     ·材料和方法第39页
   ·尸体剖检第39-40页
   ·病理切片制备第40页
     ·材料和方法第40页
 6.阳性血清的制备和血清中和实验第40-41页
   ·材料和方法第40-41页
       ·病毒的处理第40页
       ·阳性血清的采集第40页
       ·血清中和试验(固定病毒-稀释血清法)第40-41页
 7.RT-PCR鉴定第41-45页
   ·材料和方法第41页
   ·病毒的培养和RNA的提取第41-42页
   ·反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)第42页
     ·RT(Reverse transcription)第42页
     ·PCR(polymerase chain reaction)第42页
   ·PCR产物鉴定及纯化回收第42-43页
     ·鉴定第42页
     ·纯化回收第42-43页
   ·PCR产物连接与转化第43页
     ·连接第43页
       ·转化第43页
   ·重组质粒提取、鉴定及序列测定第43-44页
     ·碱裂解法提取质粒第43-44页
   ·重组质粒的鉴定第44页
   ·序列测定第44页
   ·基因序列确定及分析、比较第44-45页
二、结果第45-67页
 1.电镜观察第45页
 2.血凝实验第45-46页
 3.病毒感染力TOC-ID50的测定第46-49页
 4.致病性实验结果第49-50页
   ·病毒接种SPF鸡胚死亡的鸡胚病变第49页
   ·病毒接种SPF雏鸡的病变第49页
   ·剖检SPF雏鸡的病变第49页
   ·病理切片观察第49-50页
 5.病毒血清中和实验(固定病毒稀释血清)第50-61页
   ·PF毒株抗原第50-51页
   ·GZ毒株抗原第51-53页
   ·PT毒株抗原第53-55页
   ·YX毒株抗原第55-56页
   ·Mass毒株抗原第56-58页
   ·交叉中和实验检测结果第58页
   ·五株病毒毒株之间的血清中和交叉关系第58-61页
 6 3CL基因片段的核苷酸序列分析与比较第61-67页
   ·GZ株和参考株3CL基因片段核苷酸序列的比较第61-64页
   ·GZ株和参考株3CL基因片段推导的氨基酸序列的比较第64-65页
   ·3CL基因片段的核苷酸序列和氨基酸序列同源性第65-67页
三、分析与讨论第67-74页
 1.病毒的分离第67页
 2.病毒的血凝性第67-68页
 3.病毒的培养第68-69页
 4.致病性实验第69-70页
 5.血清型第70-71页
   ·CL~(pro)基因片段的核苷酸序列和推导的氨基酸序列分析第71-74页
四、结论第74-75页
参考文献第75-81页
附录:相关试剂配方第81-83页
致谢第83页

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