纳豆激酶基因在酿酒酵母中表达的研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 1 绪论 | 第7-17页 |
| ·纳豆激酶研究进展 | 第7-13页 |
| ·纳豆激酶的由来及功用 | 第7页 |
| ·纳豆激酶的性质及结构 | 第7-8页 |
| ·纳豆激酶国内外分子生物学研究进展 | 第8-10页 |
| ·纳豆激酶溶栓机制及活性测定方法 | 第10-12页 |
| ·纳豆激酶发展前景展望 | 第12-13页 |
| ·酿酒酵母基因工程研究进展 | 第13-16页 |
| ·酿酒酵母基因工程的载体系统 | 第14页 |
| ·YEp酵母附加体型质粒的产生和特性 | 第14-15页 |
| ·酿酒酵母的转化方法 | 第15页 |
| ·影响酵母表达的因素 | 第15-16页 |
| ·酿酒酵母发展展望 | 第16页 |
| ·本课题的目的与意义 | 第16-17页 |
| 2 纳豆激酶基因的克隆和序列分析 | 第17-35页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·实验菌种来源及质粒来源 | 第18页 |
| ·实验药品 | 第18页 |
| ·实验器材 | 第18-19页 |
| ·PCR引物 | 第19页 |
| ·实验试剂的配制 | 第19-21页 |
| ·培养基配制方法 | 第19-20页 |
| ·提DNA溶液配制方法 | 第20页 |
| ·电泳缓冲液配制方法 | 第20-21页 |
| ·质粒提取溶液配方 | 第21页 |
| ·STET(pH8.0)的配方 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-27页 |
| ·纳豆芽孢杆菌1.1086的活化 | 第21页 |
| ·纳豆芽孢杆菌1.1086溶栓活性的测定 | 第21-22页 |
| ·纳豆激酶基因克隆体系的构建 | 第22-27页 |
| ·实验结果及分析 | 第27-33页 |
| ·纳豆芽孢杆菌1.1086溶栓活性的测定 | 第27-28页 |
| ·纳豆芽孢杆菌1.1086基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·重组克隆转化子的鉴定 | 第29-31页 |
| ·T simple-NK重组子的序列检测 | 第31-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 3 纳豆激酶在酿酒酵母中的表达和活性测定 | 第35-46页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·实验菌种及质粒来源 | 第36页 |
| ·实验药品 | 第36页 |
| ·实验器材 | 第36-37页 |
| ·实验试剂的配制 | 第37页 |
| ·培养基配方 | 第37页 |
| ·缓冲液等试剂的配制 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-41页 |
| ·重组表达载体pYES2-NK的构建 | 第37-39页 |
| ·重组质粒pYES2-NK转化酿酒酵母H158 | 第39-40页 |
| ·重组酵母菌H158-NK的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·重组酵母菌H158-NK溶栓活性的检测 | 第41页 |
| ·实验结果及分析 | 第41-44页 |
| ·重组表达载体pYES2-NK的构建 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pYES2-NK转化酿酒酵母H158 | 第42-43页 |
| ·重组酵母菌溶栓活性的检测 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
