| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-42页 |
| ·植物在各种非生物逆境胁迫下的细胞信号传导途径 | 第14-20页 |
| ·植物体内非生物逆境胁迫信号传递的一般途径 | 第14-17页 |
| ·各种非生物逆境胁迫信号在植物体内传递时相互关联 | 第17-19页 |
| ·非生物逆境胁迫信号在植物体内传递的几个分支 | 第19-20页 |
| ·用于植物抗逆性改良的一些候选基因及编码产物 | 第20-28页 |
| ·在植物抗逆反应中直接起保护作用的功能蛋白基因及编码产物 | 第21-24页 |
| ·渗透调节物质合成酶基因及产物 | 第21-23页 |
| ·清除活性氧的酶基因及产物 | 第23页 |
| ·保护细胞免受水分胁迫伤害的功能蛋白基因及产物 | 第23-24页 |
| ·在信号传递和胁迫应答基因表达中起调节作用的基因及编码产物 | 第24-28页 |
| ·传递信号和调控基因表达的转录因子 | 第24-26页 |
| ·感应和转导胁迫信号的蛋白激酶和其它蛋白酶类 | 第26-28页 |
| ·植物抗逆性的鉴定与评价 | 第28-30页 |
| ·地上部形态生理性状与植物抗旱性 | 第28-29页 |
| ·地下部形态生理性状与植物抗旱性 | 第29-30页 |
| ·植物诱导型启动子的研究进展 | 第30-33页 |
| ·光诱导型启动子 | 第30-31页 |
| ·热诱导型启动子 | 第31页 |
| ·创伤诱导型启动子 | 第31页 |
| ·激素诱导型启动子 | 第31-32页 |
| ·生物逆境胁迫诱导型启动子 | 第32-33页 |
| ·研究植物基因功能的策略和方法 | 第33-41页 |
| ·基因功能丧失或减少 | 第33-37页 |
| ·插入突变 | 第34-35页 |
| ·反义抑制和共抑制 | 第35页 |
| ·RNA干扰(RNAi) | 第35-37页 |
| ·基因功能增加或获得 | 第37-38页 |
| ·超量表达(Over-expression) | 第37页 |
| ·诱导表达(Inducible expression) | 第37-38页 |
| ·基因的异位表达(Ectopic expression) | 第38-39页 |
| ·微阵列(Microarray) | 第39页 |
| ·酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system) | 第39-41页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第41-42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-55页 |
| ·实验材料 | 第42-44页 |
| ·骨架载体、超表达载体构建及水稻遗传转化 | 第44-46页 |
| ·骨架载体构建 | 第44-45页 |
| ·超表达载体构建 | 第45页 |
| ·水稻遗传转化 | 第45-46页 |
| ·干旱诱导型启动子OsLEAP的克隆及活性鉴定 | 第46-47页 |
| ·干旱诱导型启动子OsLEAP分离克隆 | 第46页 |
| ·干旱诱导型启动子OsLEAP活性分析 | 第46-47页 |
| ·定性分析(组织化学染色分析) | 第47页 |
| ·定量分析(MU荧光值测定) | 第47页 |
| ·对来源于cDNA文库的水稻内源基因测序验证 | 第47-48页 |
| ·DNA提取、转基因植株PCR阳性检测及转基因拷贝数检测 | 第48-49页 |
| ·DNA提取 | 第48页 |
| ·PCR阳性检测 | 第48-49页 |
| ·转基因Southern检测 | 第49页 |
| ·RNA的抽提、反转录及水稻内源基因表达检测 | 第49-50页 |
| ·RNA的抽提,反转录 | 第49页 |
| ·基因表达Northern检测 | 第49页 |
| ·基因表达Real-time PCR检测 | 第49-50页 |
| ·水稻内源基因及报告基因GUS表达量检测的材料准备 | 第50-51页 |
| ·转基因植株超表达检测 | 第51页 |
| ·田间试验 | 第51-54页 |
| ·转基因植株的形态表型观察 | 第51页 |
| ·转基因植株抗旱性初筛 | 第51-53页 |
| ·大田生长环境下的抗旱试验 | 第52页 |
| ·在PVC管条件下的抗旱试验 | 第52-53页 |
| ·转基因植株的抗旱性复筛 | 第53页 |
| ·供试材料的性状调查 | 第53-54页 |
| ·大田生长环境下材料的性状调查 | 第53页 |
| ·PVC管栽培条件下的材料性状调查 | 第53-54页 |
| ·田间数据收集、整理与统计分析 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-98页 |
| ·骨架载体构建 | 第55-57页 |
| ·对水稻内源抗旱候选基因进行测序及序列分析 | 第57-62页 |
| ·BI133C15(OsLEA3-1)基因 | 第57-58页 |
| ·EI77D14(OsPR4-1)基因 | 第58-60页 |
| ·BI119L07(OsGO20-1)基因 | 第60页 |
| ·BI153M13(OsWSI724)基因 | 第60-61页 |
| ·BI77H21(OsHVA22-1)基因 | 第61-62页 |
| ·干旱诱导型启动子OsLEAP的克隆及活性分析 | 第62-65页 |
| ·干旱诱导型启动子OsLEAP序列 | 第62-64页 |
| ·干旱诱导型启动子OsLEAP活性鉴定 | 第64-65页 |
| ·组织染色分析 | 第64页 |
| ·MU荧光值测定 | 第64-65页 |
| ·转化载体的构建及遗传转化 | 第65-68页 |
| ·T_0代转基因植株PCR阳性分析 | 第68-69页 |
| ·T_0代转基因植株Southern拷贝数分析 | 第69-71页 |
| ·水稻内源抗旱候选基因的表达模式分析 | 第71-75页 |
| ·利用Northern杂交分析基因OsLEA3-1的表达模式 | 第71-72页 |
| ·利用Real-time PCR分析基因OsPR4-1、OsGO20-1表达模式 | 第72-75页 |
| ·转基因植株超量表达检测 | 第75-78页 |
| ·转基因植株田间抗旱性筛选与鉴定 | 第78-98页 |
| ·T_1代转基因家系在正常生长条件下的形态表型鉴定 | 第78-79页 |
| ·T_1代转基因植株抗旱性初筛 | 第79-88页 |
| ·大田生长环境下的田间试验 | 第79-83页 |
| ·PVC管条件下的干旱胁迫试验 | 第83-88页 |
| ·转基因家系抗旱性复筛 | 第88-98页 |
| 4 讨论 | 第98-107页 |
| ·早世代转基因家系产量下降的可能原因 | 第98-99页 |
| ·评价植株抗旱性的指标 | 第99-100页 |
| ·不同筛选环境下进行转基因抗旱性鉴定 | 第100-101页 |
| ·利用候选基因策略进行作物抗旱性改良 | 第101-102页 |
| ·筛选标记基因在转基因植物中的应用 | 第102-103页 |
| ·转基因水稻抗旱育种 | 第103-105页 |
| ·转基因水稻安全性问题 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-128页 |
| 附录A:载体结构图 | 第128-131页 |
| 附录B:基本实验操作步骤 | 第131-140页 |
| Protocol 1:Agrobacterium-mediated transformation | 第131-132页 |
| Protocol 2:GUS staining protocol | 第132页 |
| Protocol 3:Fluorometric GUS assay | 第132-133页 |
| Protocol 4:Extraction of total DNA with CTAB method | 第133-135页 |
| Protocol 5:TRIzol reagent RNA isolation method | 第135页 |
| Protocol 6:Reverse transcription PCR | 第135-137页 |
| Protocol 7:Northern hybridization | 第137-140页 |
| 附录C:水稻内源抗逆候选基因的序列 | 第140-143页 |
| 简历 | 第143-145页 |
| 致谢 | 第145页 |
