| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第15-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-55页 |
| ·病毒的分类 | 第16页 |
| ·病毒的命名 | 第16页 |
| ·疱疹病毒和α疱疹病毒 | 第16页 |
| ·PRV的分子生物学 | 第16-41页 |
| ·病毒粒子的结构 | 第17-18页 |
| ·基因组和基因产物 | 第18-21页 |
| ·衣壳蛋白 | 第21-22页 |
| ·间质蛋白 | 第22-25页 |
| ·囊膜蛋白 | 第25-26页 |
| ·病毒复制周期 | 第26页 |
| ·侵入 | 第26-28页 |
| ·病毒转录激活因子和转录级联 | 第28-33页 |
| ·在PRV感染过程中宿主转录的改变 | 第33页 |
| ·在潜伏期的基因表达 | 第33-34页 |
| ·DNA复制 | 第34页 |
| ·核酸代谢 | 第34-36页 |
| ·衣壳的形成 | 第36页 |
| ·DNA衣壳化 | 第36-37页 |
| ·释放 | 第37-40页 |
| ·病毒抗凋亡基因 | 第40-41页 |
| ·PRV作为一种模式病毒的优点 | 第41页 |
| ·伪狂犬病对家畜的影响 | 第41-45页 |
| ·历史上的发现 | 第41页 |
| ·在非自然宿主中伪狂犬病毒感染的致死性 | 第41-42页 |
| ·PRV对猪的急性感染 | 第42-43页 |
| ·PRV在猪体内的潜伏 | 第43页 |
| ·修饰的活疫苗 | 第43-44页 |
| ·DNA疫苗 | 第44-45页 |
| ·PRV的诊断 | 第45页 |
| ·伪狂犬病的世界分布 | 第45页 |
| ·感染性克隆 | 第45-53页 |
| ·疱疹病毒的细胞遗传学 | 第46-47页 |
| ·疱疹病毒的大肠杆菌遗传学 | 第47-48页 |
| ·疱疹病毒基因组的BAC克隆 | 第48-53页 |
| ·结论和前景 | 第53页 |
| ·展望 | 第53-55页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第55-56页 |
| 第3章 材料与方法 | 第56-79页 |
| ·实验材料 | 第56-64页 |
| ·毒株、细胞与菌种 | 第56页 |
| ·载体与质粒 | 第56-61页 |
| ·主要药品与试剂盒 | 第61页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第61-62页 |
| ·缓冲液 | 第62-64页 |
| ·实验动物 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-79页 |
| ·PRV的增殖 | 第64-65页 |
| ·PRV基因组DNA提取 | 第65页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第65页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第65-66页 |
| ·连接产物的转化 | 第66页 |
| ·质粒的小量制备 | 第66-67页 |
| ·质粒的大量制备 | 第67页 |
| ·诱导表达 | 第67-68页 |
| ·包涵体提取、纯化与复性 | 第68页 |
| ·PRV UL14多克隆抗体的制备 | 第68页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第68-69页 |
| ·Western blotting | 第69页 |
| ·Southern blotting | 第69-71页 |
| ·PRV UL14真核表达 | 第71-72页 |
| ·流式细胞术检测PRV UL14抗凋亡活性 | 第72页 |
| ·PRV感染细胞后UL14的表达分析 | 第72-73页 |
| ·共转染 | 第73-74页 |
| ·噬斑纯化 | 第74页 |
| ·PCR检测外源基因在重组病毒中整合 | 第74-76页 |
| ·流式细胞术检测重组病毒PRV-UL14D绿色荧光表达 | 第76页 |
| ·病毒侵入试验 | 第76页 |
| ·噬斑大小测定 | 第76-77页 |
| ·病毒体外增殖曲线测定 | 第77页 |
| ·病毒对小鼠的致病性分析 | 第77页 |
| ·PRV透射电子显微镜镜观察 | 第77页 |
| ·PRV TK~-/gG~- BAC DNA的小鼠免疫试验 | 第77-78页 |
| ·病毒微量中和试验(固定病毒-稀释血清法) | 第78页 |
| ·统计方法 | 第78-79页 |
| 第4章 结果与分析 | 第79-123页 |
| ·PRV Ea株基因组BamHI第3片段的克隆与序列分析 | 第79-82页 |
| ·BamHI第3片段的克隆 | 第79页 |
| ·BamHI第3片段的序列测定 | 第79-82页 |
| ·PRV Ea株UL14基因的克隆与表达 | 第82-116页 |
| ·UL14基因的PCR扩增 | 第82-83页 |
| ·UL14基因的克隆与序列分析 | 第83-85页 |
| ·UL14基因的原核表达 | 第85-87页 |
| ·UL14基因的真核表达 | 第87-88页 |
| ·PRV UL14系列缺失突变体的构建及结构域分析 | 第88-96页 |
| ·PRV感染细胞UL14的表达分析 | 第96-98页 |
| ·UL14缺失的伪狂犬病毒突变株的构建 | 第98-105页 |
| ·UL14的缺失对PRV侵入的影响 | 第105页 |
| ·UL14的缺失对PRV噬斑形成的影响 | 第105-107页 |
| ·PRV-UL14D突变株的体外增殖特性 | 第107-111页 |
| ·PRV-UL14D突变株对小鼠的致病性 | 第111页 |
| ·UL14的缺失影响PRV囊膜的形成 | 第111-114页 |
| ·PRV UL14抗凋亡活性分析 | 第114-116页 |
| ·PRV感染性克隆的构建 | 第116-123页 |
| ·重组转移质粒的构建 | 第116-117页 |
| ·含有BAC载体序列的重组PRV TK~-/gG~-/BAC的构建与筛选 | 第117页 |
| ·含有BAC载体序列的重组PRV TK~-/gG~-/BAC的鉴定 | 第117-118页 |
| ·含有PRV TK~-/gG~-全长基因组BAC DNA的大肠杆菌的筛选 | 第118-119页 |
| ·PRV TK~-/gG~-株感染性克隆的Southern blotting鉴定 | 第119-120页 |
| ·PRV TK~-/gG~-株感染性克隆的体外增殖特性 | 第120-121页 |
| ·PRV TK~-/gG~- BAC质粒DNA对小鼠的免疫原性分析 | 第121-123页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第123-134页 |
| ·讨论 | 第123-133页 |
| ·BamHI第3片段的克隆与序列分析 | 第123-124页 |
| ·PRV UL14基因的克隆和序列分析 | 第124-125页 |
| ·PRV UL14基因的哺乳动物细胞表达 | 第125页 |
| ·PRV UL14基因结构域分析 | 第125-126页 |
| ·UL14基因在PRV感染细胞后的表达 | 第126-127页 |
| ·伪狂犬病毒转移载体 | 第127-128页 |
| ·共转染与噬斑纯化 | 第128-129页 |
| ·重组病毒的Southern blotting鉴定 | 第129-130页 |
| ·重组病毒中的基因表达 | 第130-131页 |
| ·PRV TK~-/gG~- BAC质粒DNA的免疫原性 | 第131页 |
| ·PRV UL14蛋白功能 | 第131-133页 |
| ·结论 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-155页 |
| 致谢 | 第155-156页 |
| 附录 | 第156页 |
