| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-26页 |
| ·猪圆环病毒——一种严重危害世界养猪业的重要病原 | 第10-20页 |
| ·圆环病毒的病原学研究 | 第10页 |
| ·圆环病毒的流行病学研究 | 第10-12页 |
| ·地理分布 | 第10页 |
| ·易感物种 | 第10页 |
| ·PCV2的传播 | 第10-11页 |
| ·持续感染 | 第11页 |
| ·PCV2的流行病学 | 第11页 |
| ·发病机理 | 第11-12页 |
| ·PCV的复制与转录机制 | 第12-13页 |
| ·复制模式 | 第12-13页 |
| ·复制相关基因及调控机制 | 第13页 |
| ·PCV相关疾病 | 第13-16页 |
| ·断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS) | 第13-14页 |
| ·皮炎和肾病综合症(PDNS) | 第14-15页 |
| ·繁殖障碍 | 第15-16页 |
| ·间质性肺炎 | 第16页 |
| ·PCV相关的疾病诊断 | 第16-18页 |
| ·PCV相关的疾病鉴别诊断 | 第16-17页 |
| ·PCV2的诊断 | 第17页 |
| ·PCV的实验室诊断 | 第17-18页 |
| ·PCV相关疾病的预防与控制 | 第18-20页 |
| ·管理措施 | 第18页 |
| ·混合感染 | 第18页 |
| ·免疫刺激 | 第18-19页 |
| ·PCV2的传染阶段以及母源抗体 | 第19页 |
| ·营养条件对PMWS的影响 | 第19页 |
| ·PCV2疫苗 | 第19页 |
| ·血清疗法 | 第19-20页 |
| ·遗传学 | 第20页 |
| ·RNAI的研究进展 | 第20-26页 |
| ·RNA干扰的发现与发展 | 第20页 |
| ·RNAi的分子机制 | 第20-22页 |
| ·RNAi的应用 | 第22-24页 |
| ·基因功能分析 | 第22-23页 |
| ·用于基因治疗 | 第23页 |
| ·抗病毒研究 | 第23-24页 |
| ·RNAi研究的问题与展望用 | 第24-26页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 第3章 材料与方法 | 第27-36页 |
| ·实验材料 | 第27-31页 |
| ·毒株、细胞与菌种 | 第27页 |
| ·siRNA序列、载体与质粒 | 第27-28页 |
| ·主要药品与试剂盒 | 第28页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第28-29页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第29-30页 |
| ·缓冲液 | 第30-31页 |
| ·质粒提取用缓冲液 | 第30页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第30页 |
| ·Western blot缓冲液 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-36页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·质粒的小量制备(改良的碱裂解法) | 第31-32页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第32-33页 |
| ·脂质体介导转化法(Lipfectin2000,Invitrogen Corp.) | 第33页 |
| ·病毒DNA模板的制备 | 第33页 |
| ·RT-PCR方法 | 第33-34页 |
| ·细胞中PCV RNA的提取 | 第33页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR反应条件 | 第34页 |
| ·Real-time PCR | 第34页 |
| ·cDNA的制备 | 第34页 |
| ·Real-time PCR扩增 | 第34页 |
| ·Real-time PCR反应条件 | 第34页 |
| ·Western blot | 第34-35页 |
| ·半数感染量(TCID_(50))测定 | 第35-36页 |
| 第4章 结果与分析 | 第36-46页 |
| ·SIRNAS对PCV2 REP基因表达的抑制 | 第36-41页 |
| ·Rep基因与报告基因(EGFP)融合表达载体的构建 | 第36页 |
| ·Rep基因与EGFP融合表达的荧光检测 | 第36-37页 |
| ·siRNA表达质粒与质粒pCDRep-EGFP共转染细胞后的荧光检测 | 第37-39页 |
| ·RT-PCR检测情况 | 第39-40页 |
| ·Western blot检测情况 | 第40-41页 |
| ·SIRNAS对PCV2复制的抑制 | 第41-43页 |
| ·Real-time PCR测定siRNA对病毒复制的抑制效果 | 第41-42页 |
| ·Western blot检测siRNAs对病毒复制的抑制效果 | 第42-43页 |
| ·测定病毒的TCID_(50)检测siRNA对病毒复制的抑制效果 | 第43页 |
| ·SIRNAS对PCV1复制的抑制 | 第43-46页 |
| ·Real-time PCR测定siRNA对PCV1复制的抑制效果 | 第43-44页 |
| ·Western blot检测siRNAs对PCV1复制的抑制效果 | 第44-45页 |
| ·测定病毒的TCID_(50)检测siRNA对病毒复制的抑制效果 | 第45-46页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| ·RNAi-抗圆环病毒感染的新途径 | 第46页 |
| ·siRNA的靶基因选择和设计 | 第46-47页 |
| ·PCV2 Rep在PK-15中的亚细胞定位 | 第47-48页 |
| ·siRNA对PCV复制的抑制作用 | 第48-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| 英文缩略语表(ABBREVIATION) | 第59-60页 |
| RESUME | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
